[发明专利]一种双向筛选相互作用的TCR和pMHC的方法

权利要求书

1.一种双向筛选相互作用的TCR和抗原-MHC复合物(pMHC)的方法，其包括：

(a)将多种TCR和多种pMHC展示到不同酵母细胞表面，其中展示TCR的酵母细胞和展示pMHC的酵母细胞属于不同的交配型；

(b)共培养所述展示TCR的酵母细胞和所述展示pMHC的酵母细胞；

(c)筛选出酵母细胞二倍体，并确定所述酵母细胞二倍体的TCR和pMHC；

由此筛选出相互作用的TCR和pMHC；

其中所述酵母细胞是交配缺陷型的；

优选地，所述展示TCR的酵母细胞以整合形式表达TCR；

优选地，所述展示pMHC的酵母细胞以整合形式表达pMHC。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述交配缺陷型酵母细胞是Sag1基因缺失的酵母细胞。

3.根据权利要求1-2所述的方法，其中所述酵母细胞是酿酒酵母，优选所述酿酒酵母为EBY100菌株或EBY100菌株的遗传改造菌株。

4.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其中在将多种TCR展示到酵母细胞表面时，整合第一标签到所述酵母细胞中；在将多种pMHC展示到酵母细胞表面时，整合第二标签到所述酵母细胞中；其中第一标签和每种TCR之间存在对应关系，第二标签和每种pMHC之间存在对应关系。

5.根据权利要求4所述的方法，其中在所述(a)之后，所述(b)之前，分别确定TCR和第一标签之间的对应关系以及pMHC和第二标签之间的对应关系。

6.根据权利要求5所述的方法，其中确定所述酵母细胞二倍体的TCR和pMHC的方法是通过测得酵母细胞二倍体中的第一标签和第二标签来确定的。

7.根据权利要求4-6任一项所述的方法，其中所述第一标签或第二标签是条形码序列。

8.根据权利要求7所述的方法，其中使用测序的方法分别确定TCR和第一条形码序列之间的对应关系以及pMHC和第二条形码序列之间的对应关系；并使用测序的方法测得酵母细胞二倍体中的第一条形码序列和第二条形码序列；优选地，所述测序的方法是二代测序。

9.根据权利要求7或8所述的方法，其中将多种TCR和多种pMHC展示到不同酵母细胞表面是，使用同源重组的方法将多个包含TCR序列的DNA片段或多个包含pMHC序列的DNA片段整合到酵母基因组中实现的。

10.根据权利要求9所述的方法，其中所述包含TCR序列的DNA片段中还包含第一条形码序列，包含pMHC序列的DNA片段中还包含第二条形码序列，所述第一条形码序列位于TCR序列的上游或下游，所述第二条形码序列位于pMHC序列的上游或下游，由此整合第一条形码序列或第二条形码序列到酵母细胞中。

11.根据权利要求10所述的方法，其中展示所述TCR的酵母细胞或展示所述pMHC的酵母细胞能够表达Cre重组酶；

在所述(c)中，确定所述酵母细胞二倍体的TCR和pMHC的序列前，可以通过酵母细胞中的Cre重组酶将二倍体酵母细胞中能够相互作用的TCR和pMHC分别对应的第一条形码序列和第二条形码序列重排到一个DNA分子中。

12.一种共培养物，其包含多种展示TCR的酵母细胞和多种展示pMHC的酵母细胞，其中展示TCR的酵母细胞和展示pMHC的酵母细胞属于不同的交配型；

其中所述酵母细胞是交配缺陷型的；

优选地，所述展示TCR的酵母细胞是以整合形式表达TCR；

优选地，所述展示pMHC的酵母细胞是以整合形式表达pMHC。

13.根据权利要求12所述的共培养物在用于双向筛选相互作用的TCR和抗原-MHC复合物(pMHC)的用途。