[发明专利]一种基于区域多点定面法的显微扫描平台焦平面确定方法

权利要求书

1.一种基于区域多点定面法的显微扫描平台焦平面确定方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1：先判定玻片类型，根据不同类型应用不同的焦平面确定策略；

S2：以整个盖玻片为完整区域进行栅格划分，再根据所划分的栅格区域逐个确定焦平面，每个栅格都至少要有三个标记点，以此确定整个玻片的标记点数量；

S3：以玻片左上角为坐标原点O，玻片长边为X轴，玻片短边为Y轴，垂直玻片平面向上为Z轴建立空间直角坐标系；

S4：在各个标记点处运用往复聚焦法进行聚焦操作，得到该点在其焦平面上的竖直投影为(x_i，y_i，z_i)；

S5：在各个栅格区域中，对每个栅格区域内的三个Mark点分别在焦平面上的竖直投影点(x_i，y_i，z_i)联立建立方程组求得栅格区域i的焦平面方程；

S6：选取任意位置点，判断该位置点位于哪一个区域，进而用该位置点的x、y坐标值代入所在区域的焦平面方程中求解，得到该点在焦平面上的坐标，即在该点上仅需要移动调整到所求坐标的z坐标值。

2.根据权利要求1所述的基于区域多点定面法的显微扫描平台焦平面确定方法，其特征在于，步骤S1中玻片类型包括切片类玻片和涂片类玻片。

3.根据权利要求2所述的基于区域多点定面法的显微扫描平台焦平面确定方法，其特征在于，步骤S2中，对于切片类玻片，直接选取盖玻片的四个顶角中的三个定义标记点，即划分的栅格区域为一个。

4.根据权利要求2所述的基于区域多点定面法的显微扫描平台焦平面确定方法，其特征在于，步骤S2中，对于涂片类玻片，以样本涂片区域所在的整个盖玻片为完整区域进行栅格划分，再根据所划分的栅格区域逐个确定焦平面，每个栅格都至少要有三个标记点，以此确定整个玻片的标记点数量。

5.根据权利要求4所述的基于区域多点定面法的显微扫描平台焦平面确定方法，其特征在于，在划分栅格时，玻片长边和短边分别均等分。

6.根据权利要求4所述的基于区域多点定面法的显微扫描平台焦平面确定方法，其特征在于，将每个栅格的顶点作为标记点。

7.根据权利要求4所述的基于区域多点定面法的显微扫描平台焦平面确定方法，其特征在于，对玻片进行划分栅格数为m×n的栅格后，对玻片至少需要(m+1)·(n+1)-(2|m+1)·(2|n+1)个标记点，式中“|”为整除符号，其运算法则为后面的数整除前面的数后取商，至多需要(m+1)·(n+1)个标记点。

8.根据权利要求1所述的基于区域多点定面法的显微扫描平台焦平面确定方法，其特征在于，步骤S4中往复聚焦法具体为：先自上而下完成一次聚焦操作，根据图像评价函数得到最为清晰的图像，从而得到该次聚焦时的镜头距离玻片焦平面的竖直高度；而后再自下而上完成又一次聚焦操作，得到本次聚焦时的镜头距离玻片焦平面的竖直高度；通过和首次聚焦中得到的垂直高度对比，若前后差值小于镜头的景深，则焦平面距离镜头的竖直高度取两者高度的平均值，而若前后差值大于镜头的景深，则再次对玻片进行自上而下的聚焦操作，对比三次聚焦操作得到的高度，若前后差值满足小于镜头的景深则取三者平均值，若相差仍旧较大，则重复上述操作，以此得到最优的垂直高度。

9.根据权利要求8所述的基于区域多点定面法的显微扫描平台焦平面确定方法，其特征在于，针对每个标记点往复聚焦时，采用抽帧评价聚焦法。

10.根据权利要求9所述的基于区域多点定面法的显微扫描平台焦平面确定方法，其特征在于，抽帧评价聚焦法具体为：针对一个待聚焦的视野点时，对该点进行步进拍摄同步帧速保存视频文件，对视频文件进行视频抽帧解析出每一帧图像，应用评价函数计算每一帧图像的函数值，求出函数的峰值对应的图像即为最清晰的那一帧图像，峰值对应的索引对应步进拍摄的位置即焦平面的位置。