[发明专利]毛发中褪黑素、N-乙酰血清素、6-羟基褪黑素、皮质醇和可的松同时提取和检测方法

权利要求书

1.一种毛发中褪黑素、N-乙酰血清素、6-羟基褪黑素、皮质醇和可的松同时提取和检测方法，其特征在于：包括以下步骤：

(1)采集人体毛发样本并预处理；

(2)孵育、萃取样本以提取样本中的目标物；

(3)使用高效液相色谱串联质谱法实现目标物含量的检测。

2.根据权利要求1所述的毛发中褪黑素、N-乙酰血清素、6-羟基褪黑素、皮质醇和可的松同时提取和检测方法，其特征在于：所述步骤(1)中预处理的步骤为：将采集得到的毛发样本，在室温下加入小分子有机溶剂进行清洗。

3.根据权利要求2所述的毛发中褪黑素、N-乙酰血清素、6-羟基褪黑素、皮质醇和可的松同时提取和检测方法，其特征在于：清洗所使用的小分子有机溶剂为甲醇。

4.根据权利要求1所述的毛发中褪黑素、N-乙酰血清素、6-羟基褪黑素、皮质醇和可的松同时提取和检测方法，其特征在于：所述步骤(2)中孵育、萃取的步骤为：向预处理后的头发碎段中加入孵育溶剂孵育12～36h，再将孵化后的溶液离心，取上清液，在氮气流下蒸发后，再重新用流动相溶液溶解。

5.根据权利要求4所述的毛发中褪黑素、N-乙酰血清素、6-羟基褪黑素、皮质醇和可的松同时提取和检测方法，其特征在于：孵育温度和氮气流蒸发温度均为20～30℃。

6.根据权利要求4所述的毛发中褪黑素、N-乙酰血清素、6-羟基褪黑素、皮质醇和可的松同时提取和检测方法，其特征在于：孵育溶剂由50μL的含2.5～10ng内标物的内标溶液和950μL的甲醇构成，内标物为四氘代褪黑素、四氘代N-乙酰血清素、四氘代6-羟基褪黑素、二氘代皮质醇或八氘代可的松。

7.根据权利要求1所述的毛发中褪黑素、N-乙酰血清素、6-羟基褪黑素、皮质醇和可的松的同时提取和检测方法，其特征在于：所述步骤(3)中目标物含量的检测步骤为：重溶液经高效液相色谱串联质谱仪分离后，通过质谱仪进行检测，并由内标法定量。

8.根据权利要求7所述的毛发中褪黑素、N-乙酰血清素、6-羟基褪黑素、皮质醇和可的松同时提取和检测方法，其特征在于：高效液相色谱串联质谱仪的色谱分离条件包括如下：

(1)色谱柱：C18色谱柱；

(2)流动相：甲醇和水的体积比为95∶5，其中每100mL流动相中含约0.0019g乙酸铵；

(3)流速：200μL/min；

(4)进样量：10μL。

9.根据权利要求7所述的毛发中褪黑素、N-乙酰血清素、6-羟基褪黑素、皮质醇和可的松同时提取和检测方法，其特征在于：高效液相色谱串联质谱仪的质谱检测条件包括如下：

(1)离子模式：正离子模式；

(2)离子化方法：电喷雾；

(3)离子化参数：电喷雾电压，5500伏特；离子源温度，450℃；雾化气压，20psi；卷帘气压，20psi；碰撞气压，Medium；驻留时间，100ms；

(4)监测模式：多反应监测模式。

10.根据权利要求7所述的毛发中褪黑素、N-乙酰血清素、6-羟基褪黑素、皮质醇和可的松同时提取和检测方法，其特征在于：高效液相色谱串联质谱仪的定量方法为内标法，内标法所用标准曲线包括如下：

(1)头发空白基质：远离头皮12厘米的发梢，或连续在甲醇中浸泡7天以上的发根，其中的褪黑素、N-乙酰血清素、6-羟基褪黑素、皮质醇和可的松含量低于本方法的检测限；

(2)标准曲线纵坐标：标准品的峰面积与相对应氘化物的峰面积比值；

(3)标准品：褪黑素、N-乙酰血清素、6-羟基褪黑素、皮质醇和可的松的同时提取和检测方法；

(4)氘化内标：四氘代褪黑素、四氘代N-乙酰血清素、四氘代6-羟基褪黑素、二氘代皮质醇和八氘代可的松。