[发明专利]一种长春花来源外泌体纳米囊泡及其在免疫调节方面的应用

说明书

本发明涉及具有免疫活性的长春花外泌体纳米囊泡及其制备方法，所述包括长春花外泌体纳米囊泡包括长春花叶片来源外泌体样纳米囊泡、长春花茎形成层干细胞来源外泌体样纳米囊泡、长春花叶片愈伤组织来源外泌体样纳米囊泡、长春花茎来源外泌体样纳米囊泡。本发明提取得到的长春花植物来源外泌体囊泡能够人工模拟消化系统中维持稳定，并在强酸强碱及酶消化调节下依然发挥免疫调节活性。

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种具有免疫调节活性的长春花植物来源纳米囊泡。

背景技术

长春花是夹竹桃科多年生草本植物，广泛分布于长江以南地区，是常见的行道植物，花期长，一年四季均可种植。长春花中含有的吲哚萜类生物碱被发现具有优良的抗肿瘤活性，目前已上市并用于临床肿瘤治疗的有长春碱、长春新碱、长春地辛和长春瑞滨等。但是，长春花生物碱类药物毒性较强，其注射剂经静脉注射给药后可引起周围静脉炎，还可引发恶心呕吐、神经毒性反应、骨髓抑制等不良反应。长春花生物碱类药物的毒副作用很大地限制了其在临床上的应用。

外泌体是真核细胞多囊体和质膜融合后释放到细胞外的纳米囊泡，可以长时间留在体循环中，具有良好的生物相容性和低免疫原性。此外，外泌体作为一种膜囊泡结构对亲脂性化合物及生物大分子具有亲和性，可以将药物分子包裹于囊泡之中，是一种良好的药物投递系统。近年来，许多研究人员从肿瘤细胞、干细胞、巨噬细胞等中提取具有良好生物活性的外泌体，并对其进行人工修饰，以实现精准医疗和药物靶向投递。然而，外泌体始终面临组织培养困难、提取成本高、稳定性较差的问题，难以实现最终的产业化和临床应用。

目前科学届的主要研究对象为动物来源外泌体。植物外泌体研究有限，与动物来源外泌体相比，两者种属差异大，即使同为植物来源外泌体，也需要重新建立新的研究体系，目前没有长春花外泌体纳米囊泡的公开报告。

发明内容

为了解决本领域目前面对的技术问题，本发明提供一种具有免疫活性的长春花外泌体纳米囊泡；

具体地，长春花外泌体纳米囊泡包括长春花叶片来源外泌体样纳米囊泡、长春花茎来源外泌体样纳米囊泡、长春花茎形成层干细胞来源外泌体样纳米囊泡、长春花叶片愈伤组织来源外泌体样纳米囊泡；

具体地，本发明提供一种包含长春花叶片来源外泌体纳米囊泡以及药学上可接受载体的药物组合物。

具体地，所述长春花外泌体纳米囊泡在制备用于抗肿瘤活性药物的用途

优选地，所述长春花外泌体纳米囊泡在制备用于治疗直肠癌药物的用途

优选地，所述长春花外泌体纳米囊泡具有载药功能，可以进行跨物种的通讯和调控。

具体地，所述长春花外泌体纳米囊泡在制备无需肠溶包衣的普通口服药物制剂的用途，能够耐受强酸、强碱、以及耐受RNA酶、DNA酶以及蛋白酶的消化而不失去活性

优选地，所述药物组合物包括长春花叶片来源外泌体纳米囊泡和长春花茎形成层干细胞来源外泌体样纳米囊泡

优选地，所述长春花叶片来源外泌体样纳米囊泡制备方法如下：

1)长春花叶片的酶解：采摘新鲜的长春花叶片，冲洗擦干。配制含有纤维素酶(每100毫升3克)和果胶酶(每100毫升0.2克)，pH在5.75～5.80之间的酶解液。每2g叶片加入100ml酶解溶液，并在25℃下，在摇床上以100rpm的速度在黑暗中孵育至少12h。静置，留取上层液体，以1000rpm离心20min除去杂质。然后在4℃条件下10000rpm离心40min，重复离心3次，取上清液，用中空纤维透析管浓缩至100ml备用。

2)一步法蔗糖垫超速离心：将7ml 0.971M蔗糖添加到超速离心管底部，然后加入样品至灌满离心管。4℃，150000×g离心90min。收集蔗糖层，加入20ml经0.22μm微孔膜过滤的磷酸盐缓冲液(PBS)，经30KDa超滤膜超滤离心去除蔗糖，浓缩至2ml，既得CLEN。