[发明专利]一种用于制备抗水稻AGO16蛋白抗体的多肽及制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种用于制备抗水稻AGO16蛋白抗体的多肽及制备方法和应用，属于基因工程技术领域。本发明提供了一种多肽在制备抗水稻AGO16蛋白的抗体中的应用，所述多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明所述应用获得的抗体效价高、亲和力强、特异性好，可与天然水稻AGO16发生特异性结合反应；制备成本低；纯化后的抗体可用于免疫印迹和免疫沉淀。本发明抗体也可用于分析AGO16蛋白结合sRNA的特征，为进一步解析AGO16蛋白的生物学功能提供依据。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，具体涉及一种用于制备抗水稻AGO16蛋白抗体的多肽及制备方法和应用。

背景技术

基因沉默是真核生物中一种高保守、序列特异的基因表达调控方式。根据作用靶标，可将其分为两类：以RNA为靶标，使其降解或抑制蛋白翻译，称为转录后水平基因沉默(post-transcriptional gene silencing，PTGS)；以染色质为靶标，使其DNA或组蛋白甲基化从而抑制RNA转录的起始，称为转录水平基因沉默(transcriptional gene silencing，TGS)。

基因沉默中最重要的组成部分是小分子RNA(small RNA，sRNA)和Argonaute(AGO)蛋白，各类sRNA通过与AGO蛋白结合，进而形成RNA沉默复合物(RNA-Induced SilencingComplexes，RISCs)，并遵循碱基互补配对原则识别靶标位点。AGO作为RISCs的关键组成部分，对小分子RNA的招募和发挥作用必不可少。AGO蛋白大约有100kDa，主要具有三个结构域：PAZ、Mid和PIWI。PAZ结构域可以特异识别并结合小分子单链RNA3’端核苷酸；Mid结构域有一个深穴，特异结合磷酸化的5’末端来固定RNA；PIWI结构具有外切酶活性，可以切割RNA底物，是AGO蛋白剪切催化的活性中心。植物AGO蛋白根据其序列同源性可分为三个亚家族：AGO1亚家族、AGO7亚家族和AGO4亚家族。

AGO16属于AGO4蛋白亚家族，可作为RISCs的核心组分参与转录水平基因沉默：RNA介导的DNA甲基化(RNA-directed DNAmethylation，RdDM)。但目前并没有用于检测AGO16的产品。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于制备抗水稻AGO16蛋白抗体的多肽及制备方法和应用。本发明提供的多肽制备得到的抗水稻AGO16蛋白抗体能够实现水稻AGO16蛋白的检测，可用于分析与AGO16结合的sRNA，进一步解析AGO16生物学功能，也可用于分析AGO16互作蛋白，深入解析RISCs组分。

本发明提供了一种多肽在制备抗水稻AGO16蛋白的抗体中的应用，所述多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

优选的是，所述多肽包括修饰后的多肽，所述修饰包括N端修饰或载体蛋白修饰。

优选的是，所述N端修饰为在多肽N端增加一个半胱氨酸残基。

优选的是，所述载体蛋白修饰为将多肽与载体蛋白进行偶联，所述载体蛋白包括匙孔血蓝蛋白。

本发明还提供了一种用于制备抗水稻AGO16蛋白的抗体的多肽，所述多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

本发明还提供了一种用于制备抗水稻AGO16蛋白的抗体的偶联复合物，所述偶联复合物由氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的多肽与载体蛋白偶联获得。

优选的是，所述载体蛋白包括匙孔血蓝蛋白。

本发明还提供了一种抗水稻AGO16蛋白的抗体的制备方法，包括以下步骤：合成氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的多肽，将所述多肽进行N端修饰，得到氨基酸序列如SEQ IDNO.2所示的N端修饰多肽，将所述N端修饰多肽与载体蛋白交联，免疫动物，取免疫的动物的血制备抗血清，对血清进行分离纯化，得到抗体。