[发明专利]一种保健酒羟基自由基清除率的快速检测方法

说明书

本发明属于化学检测技术领域，具体涉及一种保健酒羟基自由基清除率的快速检测方法，包括：配制罗丹明B溶液、FeSO₄溶液、H₂O₂溶液及抗坏血酸溶液；以抗坏血酸为标准羟基自由基清除剂，制作标准显色卡；用紫外可见分光光度法标定标准羟基自由基清除率值；待测保健酒样品测试，确定保健酒羟基自由基清除率值。本发明以抗坏血酸为标准制作标准显色卡，使保健酒的抗氧化性具有较强的参照性和可比性，检测方法具有快速、方便、简单、安全、成本低的优点。

技术领域

本发明属于化学检测技术领域，具体涉及一种保健酒羟基自由基清除率的快速检测方法。

背景技术

羟基自由基(·OH)被认为是人体新陈代谢产生的活性最强的活性氧，在体内的半衰期约为10^-9秒，具有极强的氧化能力。过量的·OH能够通过加成反应、电子转移、脱氢等多种方式与生物体内的分子发生相互作用致使脂类、核酸等物质发生氧化性损伤，同时也会引发蛋白质变性、酶失去活性，最终导致机体衰老或者引起肿瘤、糖尿病等诸多疾病的发生。·OH清除剂能抑制·OH产生的损伤，维持机体正常的生命代谢。有效的·OH清除剂对于阻止生命体病变、衰老等具有实际意义。保健酒中通常含有来源于植物和中草药提供的抗氧化剂，能够阻止氧化反应的发生(干扰链式反应、氧自由基初始反应)，有效清除机体内·OH，致使保健酒清除自由基功效日益被重视。然而，如何快速有效的评价保健酒的抗氧化性仍然是一个挑战。目前，常用的羟基自由基清除率测定方法有分光光度法、化学发光法、电子自旋共振法、高效液相色谱法等，这些方法因为消耗较多时间，使用昂贵的仪器、程序较为复杂等因素，在实际应用当中受到限制。开发快速、简便、安全的保健酒羟基自由基清除率测定方法无疑对评价保健酒的抗氧化性有实际的应用价值。

发明内容

鉴于此，本发明的目的在于提供一种保健酒羟基自由基清除率的快速检测方法，该检测方法具有快速、方便、简单、安全、成本低等优点。

为实现上述目的，本发明是通过以下技术方案来实现：

一种保健酒羟基自由基清除率的快速检测方法，包括如下步骤：

步骤1：配制罗丹明B溶液、FeSO₄溶液、H₂O₂溶液和抗坏血酸溶液；

步骤2：将罗丹明B溶液、FeSO₄溶液与去离子水按比例混合均匀得到溶液Ⅰ，将定量滤纸浸润到溶液Ⅰ中20-30s，取出室温下晾干，得到羟基自由基清除率为100％的显色卡；

步骤3：将罗丹明B溶液、FeSO₄溶液、H₂O₂溶液与去离子水按比例混合均匀得到溶液Ⅱ，将定量滤纸浸润到溶液Ⅱ中20-30s，取出室温下晾干，得到羟基自由基清除率为0％的显色卡；

步骤4：将罗丹明B溶液、FeSO₄溶液与去离子水按比例混合均匀，取等体积的上述混合液置于若干支比色管中，分别加入不同体积的抗坏血酸溶液，再加入H₂O₂溶液，充分摇匀，反应1-2min后，将定量滤纸分别浸润到上述不同反应液中20-30s，取出室温下晾干，得到一系列颜色由浅至深的标准显色卡；

步骤5：用紫外可见分光光度计分别测定溶液Ⅰ、溶液Ⅱ以及步骤4中不同反应液的吸光度值，并用以下公式计算不同反应液对应的标准羟基自由基清除率：

其中，Inhibition为标准羟基自由基清除率，A₀为羟基自由基清除率为100％的显色卡所对应的溶液Ⅰ的吸光度，A为羟基自由基清除率为0％的显色卡所对应的溶液Ⅱ的吸光度，As为步骤4中不同颜色的标准显色卡所对应的反应液的吸光度值；