[发明专利]一株表达SARS-CoV-2 S1蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞系及中和活性抗体

说明书

本发明属于细胞工程与免疫学领域，具体涉及一株表达新冠病毒S1蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞系及中和活性抗体。本发明筛选获得一株能高效稳定分泌表达新冠病毒S1蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞系以及其分泌的新冠病毒S1蛋白单克隆抗体；利用普通细胞培养皿培养本发明的重组杂交瘤细胞系，产量可达10mg/L，且纯度能达90%以上；本发明的单抗具有高中和活性，单抗浓度为0.00103μg/mL时即可抑制50％以上新冠假病毒活性，是目前所报告的新冠单抗中和活性最佳的。本发明提供的杂交瘤细胞系或单克隆抗体在新冠病毒的血清学检测、制备新冠病毒感染的试剂或药物及制备新冠病毒抗原或抗体检测的试剂中具有重要的应用价值。

技术领域

本发明属于细胞工程与免疫学领域，具体涉及一株表达新冠病毒S1蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞系及中和活性抗体。

背景技术

新冠病毒传染性极强，人群普遍易感，临床症状以发热、干咳、乏力为主，严重者并发急性呼吸窘迫综合征。

SARS-CoV-2属于β属的新型冠状病毒，有包膜，直径为60-140nm，基因组序列是具有29903bp的单链RNA，病毒包膜结构主要由三种蛋白组成：刺突糖蛋白(S，SpikeProtein)、小包膜糖蛋白(E，Envelope Protein)和膜糖蛋白(M，Membrane Protein)，其中，S蛋白在识别并结合宿主细胞表面受体，并介导病毒包膜与细胞膜融合的过程中起到关键性作用。S蛋白由两个亚基组成：S1和S2，S1亚基包含病毒的受体结合域RBD（receptorbinding domain，RBD），是参与冠状病毒识别细胞受体的主要部分，RBD通过结合受体细胞表面的ACE2启动病毒感染，而对S1和S2亚基的研究表明，S1亚基中的RBD包含了SARS-CoV-2的大部分中和抗原表位，作为亚单位疫苗时可产生较S2更高的中和抗体滴度，并且比全长的S蛋白诱导产生的非特异中和反应要低。

目前已有多种疫苗用于SARS-CoV-2的预防，但尚无特效药物针对性治疗。恢复期患者血浆中含有高浓度特异性的抗原中和抗体，输入患者体内后，可以中和新冠病原体，介导有效的免疫反应，因此，研发具有高中和活性的单抗药物将为新冠病毒的患者提供有效的治疗手段，降低死亡率，保障患者生命安全。

发明内容

本发明所要解决的第一个技术问题是提供一株能高效稳定分泌表达新冠病毒S1蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞系以及其分泌的新冠病毒S1蛋白单克隆抗体。

本发明所要解决的第二个技术问题是将上述分泌新冠病毒S1蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞系及其分泌的新冠病毒S1蛋白单克隆抗体应用于制备诊断、预防或治疗新冠病毒感染的试剂或药物中。

为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案：

本发明的第一个目的是提供一株能分泌表达新冠病毒S1蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞系，其特征在于，其保藏于广东省微生物菌种保藏中心，地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，保藏编号为GDMCC No：62227，分类命名为杂交瘤细胞株SARS-CoV-2A12，保藏日期为2022年1月20日，保藏期限为三十年。

本发明的第二个目的是提供一种如上述所述杂交瘤细胞系的制备方法，包括如下步骤：

S1、以纯化的重组人SARS-Cov2 S1蛋白作为免疫原，经皮下和腹腔多点免疫8-12周龄BALB/c小鼠，隔2周加强免疫一次，共免疫三次；

S2、对免疫后的小鼠取血，ELISA筛选抗体效价，将抗体效价高于1：80000的小鼠准备用做融合，在融合前7天，再次加强免疫，然后取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合；

S3、经过有限稀释法多次克隆筛选得到单克隆细胞系。

优选的，所述步骤S1中重组人SARS-Cov2 S1蛋白为经优化和突变后重组表达的蛋白，所述重组人SARS-Cov2 S1蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。