[发明专利]一种靶向GPC3嵌合抗原受体T细胞及其应用

说明书

本发明提供了一种靶向GPC3嵌合抗原受体T细胞(CAR‑T)及其应用。本发明通过筛选得到靶向GPC3的scFV重链和轻链作为CAR的结构，具有高亲和力和高特异性，能够很好的浸润至实体肿瘤内部，在动物体内发挥优异的抑瘤效果。

技术领域

本发明涉及一种细胞免疫治疗领域。具体地，涉及一种靶向GPC3嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)及其应用。

背景技术

CAR-T(Chimeric Antigen Receptor T cell)的概念最早由以色列科学家ZeligEshhar在1989发表的PNAS文章中提出，包括抗原结合区、铰链区、跨膜区和胞内信号组成，经历了几代结构的发展和优化。2017年全球首款CAR-T产品Kymriah获得FDA批准震撼上市，用于儿童和年轻成年患者急性淋巴细胞性白血病(ALL)。截止目前有多款靶向CD19或BCMA的CAR-T产品已在多个国家或地区获得上市，而且都达到了惊人的治疗效果；然而，这些产品都是针对血液肿瘤的，目前针对实体肿瘤还未有一款CAR-T产品获批准上市，大多数的实体肿瘤CAR-T临床结果，也没有血液肿瘤那么耀眼。

磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC3)蛋白是一种细胞膜表面的硫酸乙酰肝素糖蛋白，在婴儿期的一些组织中，特别是肝脏和肾脏中表达，是与器官形成相关的胞外基质蛋白；在成人组织中几乎观察不到GPC3的表达，但是在肝细胞癌、黑素瘤、卵巢透明细胞癌、肺鳞状细胞癌等各种癌组织中高表达。因此GPC3是一种很好的肿瘤治疗靶点。

因此，本领域亟待开发一种针对实体肿瘤的、靶向GPC3嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)产品。

发明内容

本发明的目的在于提供一种靶向GPC3嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)及其应用。

在本发明的第一方面，提供了一种靶向GPC3的单链可变片段(scFv)，所述单链可变片段包含重链可变区VH和轻链可变区VL，所述重链可变区包括以下三个互补决定区CDR：

SEQ ID NO.18所示的HCDR1，

SEQ ID NO.19所示的HCDR2，和

SEQ ID NO.20所示的HCDR3；和/或

所述轻链可变区包括以下三个互补决定区CDR：

SEQ ID NO.21所示的LCDR1，

SEQ ID NO.22所示的LCDR2，和

SEQ ID NO.23所示的LCDR3。

在另一优选例中，所述单链可变片段包含SEQ ID NO：3所示氨基酸序列的VH和SEQID NO：7所示氨基酸序列的VL。

在另一优选例中，所述的scFv包含VH和VL之间的接头。

在另一优选例中，所述的scFv的结构如下式a或b所示：

V_L-V_H (a)；

V_H-V_L (b)

其中，V_H为抗体重链可变区；V_L为抗体轻链可变区；“-”为连接肽或肽键。

在另一优选例中，所述的接头为柔性接头，较佳地，所述接头为(G4S)n，中n为1-4，较佳地n为2-4，更佳地n为3。

在本发明的第二方面，提供了一种嵌合抗原受体(CAR)融合蛋白，其从N末端到C末端包含：

(i)本发明的第一方面所述的scFv，

(ii)跨膜结构域，