[发明专利]一种高抗病性苍术的组织培养方法

说明书

本发明提供一种高抗病性苍术的组织培养方法通过对苍术外植体的表面消毒、愈伤组织的培养、以及对不同阶段培养基的组成进行优化调整，解决了生根难、污染、褐化、继代培养后抗性缺失、难以与母本品质一致等问题，且在苍术组织培养与快速繁殖的过程中，对生长素和细胞分裂素的种类和组成进行及时调整，提高了组织培养的效率，促进苍术组培苗的生长，避免出现褐化和污染现象；以及在愈伤组织喷洒处理菌液以避免嫩幼叶片受到菌液中致病细菌的感染死亡，为之后的苍术愈伤组织分化与植株的驯化奠定良好基础，且操作简单、成本低廉，有着良好的市场前景，能为苍术的育种和生长提供良好的帮助。

技术领域

本发明属于植物组织培养领域，具有涉及一种高抗病性苍术的组织培养方法。

背景技术

苍术属于菊科苍术属多年生、宿根草本植物，是我国传统中药材，味辛、苦、性温，具有健脾燥湿，祛风寒的效能。由于苍术用药部位以块根为主，其野生资源已处于严重衰竭状态，受人为破坏严重，为了拯救这一濒危植物，保护种质资源，解决苍术的种苗和品质复壮问题，为苍术药材生产提供优质原料，很多专家学者用植物组织培养的方法对苍术进行快速繁殖。

植物组织培养是植物快速繁殖的一种最为有效的方法，与传统繁殖方法相比，组织培养既能保持原有品种和优良性状，扩大其繁殖系数，缩短育种周期，又不受季节的影响可以周年运转，可有效解决苍术种苗繁殖耗时长、繁殖系数低的问题，大幅度地提高了繁殖的效率，便于进行大规模生产。

然而，目前虽然有关于苍术组织培养研究报道，但都存在外植体消毒困难、易产生内生细菌、繁殖系数低继代培养后抗性缺失、难以与母本品质一致等问题，导致人工繁殖得到的苍术苗的抗病性差、容易感染、成活率低，严重制约了苍术组织培养的发展。

因此，研究一种新的苍术组织培养的方法，克服现有技术存在的生根难、污染、褐化、继代培养后抗性缺失、难以与母本品质一致等问题成为目前迫切需要解决的技术难题。

发明内容

为了克服现有技术存在的不足，本发明提供一种高抗病性苍术的组织培养方法，通过对苍术组织培养工艺的调整，解决了生根难、污染、褐化、继代培养后抗性缺失、难以与母本品质一致等问题，为之后的苍术愈伤组织分化与植株的驯化奠定良好基础，且操作简单、成本低廉，有着良好的市场前景，能为苍术的育种和生长提供良好的帮助。

为了实现上述目的，本发明采用如下的技术方法，一种高抗病性苍术的组织培养方法，包括以下步骤：

(1)获取外植体

选取苍术的嫩幼叶片，用无菌水冲洗1-2遍，再用75wt％的乙醇浸泡10-20s，取出后再用0.5wt％的升汞溶液浸泡5-10min，取出后将嫩幼叶切割为2-3cm长的小段；

(2)制备愈伤组织

将步骤(1)得到的小段置于萌发培养基中进行愈伤组织的诱导萌发，所述萌芽培养基以1/2MS培养基为基础培养基，另添加终浓度为500-600mg/L的CaCl2、0.6-1mg/L的TDZ、0.3-0.5mg/L的IBA，0.2-0.5mg/L的GA3、0.8-1.5g/L的PVP、5-10g/L的琼脂和30-40g/L的葡萄糖；首先暗培养8-10d，温度为25±2℃，然后进行光照培养25-30d，所述光照培养条件是光照时间13-14h/d，光照强度1600-1800lux；

(3)感染处理

将步骤(2)中诱导得到的愈伤组织从外植体上切下置于感染培养基中进行感染处理，所述感染培养基以1/2MS培养基为基础培养基，另添加终浓度为500-600mg/L的CaCl2、0.6-1mg/L的TDZ、0.3-0.5mg/L的IBA，0.2-0.5mg/L的GA3、0.8-1.5g/L的PVP、5-10g/L的琼脂和30-40g/L的蔗糖；