[发明专利]一种高抗病性苍术的组织培养方法

权利要求书

1.一种高抗病性苍术的组织培养方法，其特征在于：包括以下步骤：

(1)获取外植体

选取苍术的嫩幼叶片，用无菌水冲洗1-2遍，再用75wt％的乙醇浸泡10-20s，取出后再用0.5wt％的升汞溶液浸泡5-10min，取出后将嫩幼叶切割为2-3cm长的小段；

(2)制备愈伤组织

将步骤(1)得到的小段置于萌发培养基中进行愈伤组织的诱导萌发，所述萌芽培养基以1/2MS培养基为基础培养基，另添加终浓度为500-600mg/L的CaCl2、0.6-1mg/L的TDZ、0.3-0.5mg/L的IBA，0.2-0.5mg/L的GA3、0.8-1.5g/L的PVP、5-10g/L的琼脂和30-40g/L的葡萄糖；首先暗培养8-10d，温度为25±2℃，然后进行光照培养25-30d，所述光照培养条件是光照时间13-14h/d，光照强度1600-1800lux；

(3)感染处理

将步骤(2)中诱导得到的愈伤组织从外植体上切下置于感染培养基中进行感染处理，所述感染培养基以1/2MS培养基为基础培养基，另添加终浓度为500-600mg/L的CaCl2、0.6-1mg/L的TDZ、0.3-0.5mg/L的IBA，0.2-0.5mg/L的GA3、0.8-1.5g/L的PVP、5-10g/L的琼脂和30-40g/L的蔗糖；

首先，向步骤(2)制备得到的愈伤组织喷洒处理菌液，第一次喷洒3-5ml，间隔12小时后再次喷洒6-10ml，然而，控制温度为25±2℃，进行光照培养10-15d，所述光照培养条件是光照时间13-14h/d，光照强度1800-2000lux；

(4)诱导不定芽

将步骤(3)中得到的愈伤组织切块置于分化培养基进行不定芽的分化，所述分化培养基以1/2MS培养基为基础培养基，另添加终浓度为650-750mg/L的CaCl2、4-8mg/L的6-BA、0.4-0.8mg/L的IAA，0.5-0.8mg/L的GA3、10-15g/L的琼脂和30-40g/L的蔗糖；进行光照培养28-30d，所述光照培养条件是光照时间10-14h/d，光照强度1300-1500lux；

(5)增殖培养

将步骤(4)诱导得到的不定芽切割后置于增殖培养基中进行增殖继代培养30-35d，得到无根苗，所述增殖培养基以1/2MS培养基为基础培养基，另添加终浓度为500-600mg/L的CaCl2、3-5mg/L的6-BA、0.3-0.8mg/L的IAA，0.1-0.2mg/L的GA3、0.8-1.5g/l的PVP、5-10g/L的琼脂和30-40g/L的蔗糖；进行光照培养，所述光照培养条件是光照时间13-14h/d，光照强度1800-2000lux；

(6)生根壮苗

将步骤(5)得到的无根苗置入生根培养基中进行培养，所述生根培养基以1/2MS培养基为基础培养基，另添加终浓度为600-800mg/L的CaCl2、3-5mg/L的TDZ、0.3-0.8mg/L的NAA，0.1-0.2mg/L的GA3、0.5-1.5g/L的PVP、5-10g/L的琼脂和30-40g/L的蔗糖；

(7)炼苗

待不定根长满瓶底，植株整体生长稳健时，打开瓶口虚盖炼苗3-5d，待组培苗适应后，完全开瓶口3-5d，组培苗完全适应外部环境；将组培苗拔出，将根浸泡在生根制剂中浸泡10-20min；

(8)移栽

将步骤(7)的组培苗移栽入穴盘内，穴盘内填充基质体积比为进口泥炭:珍珠岩:蛭石:生物炭:细沙＝6:1:1:3:2，少量浇水，放置于大棚内进行生长，大棚内温度为20±2℃，湿度为85±5％。

2.根据权利要求1所述的一种高抗病性苍术的组织培养方法，其特征在于：所述步骤(1)中，在乙醇浸泡或升汞浸泡结束后，用无菌水清洗4-5次。

3.根据权利要求1所述的一种高抗病性苍术的组织培养方法，其特征在于：所述步骤(2)中，光照选用红光进行照射。

4.根据权利要求1所述的一种高抗病性苍术的组织培养方法，其特征在于：所述步骤(3)中，所述处理菌液含有黑腐病、黑斑病、叶斑病、褐斑病与枯萎病病菌其中的一种或多种。