[发明专利]一种多合一农药残留定量检测试纸和检测方法

权利要求书

1.一种多合一农药残留定量检测试纸，其特征在于：包括依次连接的样品垫、胶体金结合垫和层析膜；

所述胶体金结合垫上附着有至少两种农药的金纳米颗粒标记抗体；

所述层析膜上设置有质控线和至少两条检测线，每条检测线采用一种农药的抗原包被而成；

所述农药选自毒死蜱、甲拌磷、乐果、啶虫脒、多菌灵、腐霉利、甲氰菊酯、克百威、异丙威、百菌清、氟虫氰、对硫磷、涕灭威、三唑酮、水胺硫磷或对硫磷；

所述农药的抗原通过将农药分子与大分子蛋白偶联形成，采用如下方法之一合成：

方法1，对于含有羧基的农药，采用碳二亚胺法、活化酯法或混合酸酐法，

方法2，对于含有氨基的农药，采用重氮法、碳二亚胺法或戊二醛法，

方法3，对于含有羟基的农药，采用琥珀酸酐法、过碘酸氧化法或氯乙酸钠法。

2.按照权利要求1所述的检测试纸，其特征在于：所述农药的金纳米颗粒标记抗体通过将农药的抗体与金纳米颗粒结合得到，所述农药的抗体通过将农药的抗原免疫动物得到。

3.按照权利要求1所述的检测试纸，其特征在于：所述金纳米颗粒为银包金纳米颗粒，和/或，所述金纳米颗粒的尺寸为10-50nm。

4.按照权利要求1所述的检测试纸，其特征在于：所述大分子蛋白为牛血清蛋白或卵清蛋白。

5.按照权利要求1所述的检测试纸，其特征在于：所述农药的种类为毒死蜱、甲拌磷和乐果，所述毒死蜱的抗原采用碳二亚胺法制备得到，所述甲拌磷的抗原采用碳二亚胺法制备得到，所述乐果的抗原采用碳二亚胺法制备得到。

6.按照权利要求1所述的检测试纸，其特征在于：所述农药的种类为腐霉利、克百威、多菌灵和毒死蜱，所述腐霉利的抗原采用琥珀酸酐法制备得到，所述克百威的抗原采用重氮法制备得到，所述多菌灵的抗原采用活化酯法或混合酸酐法制备得到，所述毒死蜱的抗原采用碳二亚胺法制备得到。

7.权利要求1-6任一项所述的检测试纸的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤1，制备农药的抗原和金纳米颗粒；

步骤2，在层析膜上进行划线包被，每一种农药的抗原各划一条检测线，用抗鼠IgG划一条质控线；

步骤3，利用农药的抗原制备得到农药的抗体；

步骤4，将所述农药的抗体和金纳米颗粒结合，制成金纳米颗粒标记抗体；

步骤5，将金纳米颗粒标记抗体喷在胶体金结合垫上；

步骤6，将所述胶体金结合垫和所述层析膜作为部件，加上其他胶体金免疫层析法试纸的必要部件，组成得到多合一农药残留定量检测试纸。

8.按照权利要求7所述的制备方法，其特征在于：步骤2中，用划膜仪以0.5-2μL/cm的速度进行划线包被，包被用的溶液中农药的抗原浓度各为0.1-3mg/ml；

和/或，步骤5中，将含有农药的抗体的金纳米颗粒标记抗体的溶液以2-10μL/cm的用量喷在胶体金结合垫上，所述含有农药的抗体的金纳米颗粒标记抗体的溶液含有如下成分：PBS 2mM、BSA 0.1-5wt.％、蔗糖1-20wt.％、tween-20 0.01-1wt.％、农药的抗体各0.1-2mg/mL。

9.一种农药残留的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤1，采用提取剂提取样品，分离后得上清液；

步骤2，用稀释液稀释所述上清液，得到供试品溶液；

步骤3，将供试品溶液滴至权利要求1-6任一项所述的检测试纸的样品垫进行检测。

10.按照权利要求9所述的检测方法，其特征在于：所述提取剂为甲醇水溶液，和/或，所述稀释液含有如下成分：PBS 0.2M、tween-20 0.1-10wt.％。