[发明专利]一种脂肪间充质干细胞复苏培养液及复苏方法

说明书

本发明公开了一种脂肪间充质干细胞复苏培养液，包括基础培养基，与添加在基础培养基中的各组分：胰岛素、黄芪多糖、乙内酰脲、普利醇、荆芥内酯、L‑谷氨酰胺、维生素C。本发明提供的复苏培养液提高了脂肪间充质干细胞的复苏率和增殖活性。其中的乙内酰脲、普利醇对提高脂肪间充质干细胞的复苏率效果明显。荆芥内酯可以提高复苏后脂肪间充质干细胞的增殖活性。复苏液中的各组分协同作用，为脂肪间充质干细胞冻存后活细胞数量和活性提供保障。本发明还提供了一种脂肪间充质干细胞的复苏方法，采用本发明提供的复苏液，操作简便，经过短时间的复苏培养后，脂肪间充质干细胞具有良好的活性，可正常用于常规扩增或其他临床用途。

技术领域

本发明涉及一种培养液，尤其涉及一种脂肪间充质干细胞复苏培养液及复苏方法。

背景技术

间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)是一群具有多能性的细胞，可从包括脂肪、骨髓、脐带在内的各种组织中分离得到。因为它们具有可塑性，这些细胞具有巨大的临床和基础研究的吸引力。脂肪间充质干细胞是间充质干细胞的一种，是从脂肪组织提取的一种成体干细胞，具有向软骨、骨、脂肪等多种组织分化的潜能。脂肪组织通过脂肪抽吸术或外科手术容易获取，对供者创伤较小且不涉及伦理问题。而且，脂肪间充质干细胞在人和动物体内相对分布广泛、易于分离，且可以在体外条件下大量扩增和培养，现已是医学和组织工程领域最受欢迎的干细胞之一。

脂肪间充质干细胞在体外经过连续传代培养和冻存复苏后仍具有多向分化潜能，因此在液氮环境下超低温冻存已成为长期保存脂肪间充质干细胞的手段。脂肪间充质干细胞的冻存需要将处于对数生长期的细胞收集起来，加入含有特定成分的细胞冻存保护液制成单细胞悬液，分装于冻存管中置于液氮中进行长期冻存。冻存后的脂肪间充质干细胞需要经过复苏后才能恢复活性，正常使用。复苏率的高低会影响细胞的数量，并且部分细胞经复苏后增殖活性下降，不能满足要求。有必要研究一种用于脂肪间充质干细胞复苏的培养液，提高细胞的复苏率和活性。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的之一在于提供一种脂肪间充质干细胞复苏培养液，解决了冻存后的脂肪间充质干细胞复苏率低，活性差的问题。

本发明的目的之二在于提供一种脂肪间充质干细胞的复苏方法。

本发明的目的之一采用如下技术方案实现：

一种脂肪间充质干细胞复苏培养液，包括基础培养基，与添加在基础培养基中的各组分：胰岛素、黄芪多糖、乙内酰脲、普利醇、荆芥内酯、L-谷氨酰胺、维生素C。

优先地，所述基础培养基为DMEM/F12培养基。

优先地，各组分在基础培养基中的终浓度为：胰岛素20-30μg/mL、黄芪多糖25-35μg/mL、乙内酰脲6.5-9.5ng/mL、普利醇10-15ng/mL、荆芥内酯3.5-5.5ng/mL、L-谷氨酰胺15-20ug/mL、维生素C10-20 ng/mL。

优先地，各组分在基础培养基中的终浓度为：胰岛素25μg/mL、黄芪多糖30μg/mL、乙内酰脲8.5ng/mL、普利醇12ng/mL、荆芥内酯4.5ng/mL、L-谷氨酰胺18ug/mL、维生素C15ng/mL。

本发明的目的之二采用如下技术方案实现：

一种脂肪间充质干细胞的复苏方法，采用上述复苏培养液进行复苏。

优先地，所述脂肪间充质干细胞的复苏方法，包括以下步骤：

(1)向基础培养基中加入胰岛素、黄芪多糖、乙内酰脲、普利醇、荆芥内酯、L-谷氨酰胺、维生素C，混合均匀后过滤除菌得到复苏液，备用；

(2)取冻存的脂肪间充质干细胞在37-40℃条件下快速复苏，加入复苏液稀释后离心收集脂肪间充质干细胞；