[发明专利]一种基于人多能干细胞构建心脏类器官的方法在审
| 申请号： | 202210150888.1 | 申请日： | 2022-02-18 |
| 公开（公告）号： | CN114438021A | 公开（公告）日： | 2022-05-06 |
| 发明（设计）人： | 吴福建;杨晓菲;李富荣 | 申请（专利权）人： | 深圳市人民医院 |
| 主分类号： | C12N5/077 | 分类号： | C12N5/077;C12N5/0735 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人： | 白艳 |
| 地址： | 518020 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基于 多能 干细胞 构建 心脏 器官 方法 | ||
1.一种基于人的多能干细胞构建心脏类器官的方法，包括如下步骤：
1)将离体人的多能干细胞在不进行水凝胶包裹的条件下成球培养，得到人多能干细胞球；
2)将所述人多能干细胞球依次进行第一次分化培养、第二次分化培养和第三次分化培养，即得到心脏类器官；
在所述第一次分化培养和所述第二次分化培养前均包括将待培养细胞水凝胶包裹的步骤；
所述第一次分化培养采用的类器官分化培养基1，包括CHIR99021、B27和L-抗坏血酸-2-磷酸三钠盐；
所述第二次分化培养采用的类器官分化培养基2，其包括KY02111、B27和L-抗坏血酸-2-磷酸三钠盐；
所述第三次分化培养采用的类器官分化培养基3，其包包括B27和L-抗坏血酸-2-磷酸三钠。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：
步骤1)中的所述成球培养为将所述离体人的多能干细胞在含有Y27632的细胞培养基中培养，得到干细胞球。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：
所述含有Y27632的细胞培养基由5-10微摩尔Y27632和干细胞培养基组成；
所述培养时间为24小时；
所述离体干细胞的数量为2500-50000个/孔。
4.根据权利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于：
所述类器官分化培养基1由5微摩尔CHIR99021、1％B27和550ug/mL L-抗坏血酸-2-磷酸三钠盐、细胞基础培养基组成；
所述类器官分化培养基2由5微摩尔KY02111、1％B27和550ug/mL L-抗坏血酸-2-磷酸三钠盐、细胞基础培养基组成；
所述类器官分化培养基3由1％B27和550ug/mL L-抗坏血酸-2-磷酸三钠盐、细胞基础培养基组成。
5.根据权利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于：
所述第一次分化培养的时间为48小时；
或，所述第二次分化培养的时间为48小时。
6.根据权利要求1-5中任一所述的方法，其特征在于：
所述水凝胶为Matrgel；
所述多能干细胞为胚胎干细胞或诱导干细胞。
7.由权利要求1-6任一所述方法制备的心脏类器官。
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