[发明专利]一种快速检测粮食中重金属铅离子的免疫学方法

说明书

一种快速检测粮食中重金属铅离子的免疫学方法属于免疫学检测领域，该方法包括以下步骤：(1)取载体蛋白、双功能鳌合剂、Pb(NO₃)₂及三乙胺，于HEPES缓冲溶液中溶解，用超滤或透析的方法去除未反应的低分子物质，剩余物于HEPES缓冲溶液中保存，分装；(2)将铅离子完全抗原包被于酶标板微孔内，接着用质量百分比为3％的BSA封闭，在37℃孵育，用PBST溶液洗涤得到包被好完全抗原并封闭的ELISA酶标板；(3)将铅离子完全抗原包被于酶标板微孔内封闭，再加入待检样品，PBST溶液洗涤，再加入抗铅单克隆抗体；再用PBST溶液洗涤，加入酶标记的羊抗鼠IgG，孵育后用PBST溶液洗涤，再加入底物进行显色反应，根据显色的深浅对样品中铅离子含量进行定性和半定量分析。

本发明属于免疫学检测领域，主要涉及一种快速检测粮食中重金属铅离子的免疫学方法。

背景技术

重金属污染就是由重金属过量累积引起的污染，是导致环境恶化的一个重要因素，重金属污染物进入人体也会对人体造成极大的危害。社会经济的蓬勃发展以及生活质量的不断提高，人们对食品安全问题愈发关注。

铅是环境污染物中毒性很大的一种重金属,在自然界中分布广，工业用途多。由于铅是多亲和性毒物，易在人体的某些器官中积蓄起来造成慢性中毒危害人体健康，主要损害神经系统、血液系统、心血管及消化系统，对儿童的作用更为敏感。一些行业通过颁布行业标准规定了铅的最大允许量，其中粮食中的铅现行标准是0.4mg/kg。

传统上，环境农产品中重金属残留的检测技术主要依靠大型仪器，如原子吸收分光光度法、电感耦合等离子体-原子发射光谱法、电感耦合等离子体质谱分析、原子荧光光谱分析等，这些重金属检测方法虽然能精确测量样品中重金属含量，但检测相对费时、费力、且费用昂贵，此外，这些方法需大量的样品预处理，并在大型分析设备上进行，需要专业人员操作，难以应用于现场检测。由于上述的不足之处，检测的样品数一般会少于最佳检测数量，导致在随后进行的重金属污染程度和风险的评估工作存在较大的不确定性，受污农产品的监管也难以及时有效开展。

免疫学检测方法是一种新型、高效快速的检测方法，是采用人工制备的抗重金属抗体与抗原之间的免疫反应为基础，快速准确的表达所检样品中重金属含量。重金属的免疫检测方法具有快速、廉价、简便、灵敏、特异的优点，理论上能应用于能产生合适抗体的任何污染物质，可便携而进行现场监测，克服了传统检测方法的缺点。因此利用免疫学检测方法，能够快速、准确、便捷地检测粮食中铅离子的含量。

发明内容

本发明旨在针对现有背景技术中存在的不足，而提供的一种快速检测粮食中重金属铅离子的免疫学方法。

本发明所要解决的技术问题是通过以下技术方案来实现的：一种快速检测粮食中重金属铅离子的免疫学方法。

包括以下步骤：

(1)铅离子完全抗原的制备：取4.5～10.0mg重量份载体蛋白、0.8～1.8mg重量份双功能鳌合剂、0.7～0.8mg重量份Pb(NO₃)₂及1.4～4.5mg重量份三乙胺，于1～3ml体积份的HEPES缓冲溶液中溶解，15～30℃温度下振荡8～24h后，用超滤或透析的方法去除未反应的低分子物质，剩余物于HEPES缓冲溶液中保存，分装，得到铅离子完全抗原；

(2)包被好完全抗原并封闭的ELISA酶标板的制备：将步骤(1)所得的铅离子完全抗原包被于酶标板微孔内,铅离子完全抗原的加入量为100ng/well；接着用质量百分比为3％的 BSA封闭，在37℃孵育1～5h，于吸水纸上拍干，用PBST溶液洗涤3次得到包被好完全抗原并封闭的ELISA酶标板。其中PBST的制备是由0.01M、pH值为7.4的PBS缓冲液与 Tween-20按体积比1000:0.5混合得到；