[发明专利]一种同时鉴别10种龟鳖甲类中药的液质联用法

权利要求书

1.一种同时鉴别10种龟鳖甲类中药的液质联用法，其特征在于包括如下步骤：

1)、获得待测样品溶液；

2)、设定色谱及质谱检测条件；

3)、数据计算分析。

2.根据权利要求1所述的同时鉴别10种龟鳖甲类中药的液质联用法，其特征在于：

1)、获得待测样品溶液：

当待测样品为固体时，将待测样品先进行提取，所得提取液进行预处理，得待测样品溶液；

当待测样品为液体时，将待测样品直接进行预处理，得待测样品溶液；

2)、设定色谱及质谱检测条件：

①、色谱条件：

色谱柱：ZORBAX Eclipse Plus C18；

流速：0.3mL·min^-1；柱温：35℃；

流动相包括流动相A和流动相B，流动相A：0.1％甲酸，流动相B：乙腈；

梯度洗脱程序为：0～25min，A：95％→80％，B：5％→20％；25～50min，A：80％→5％，B：20％→95％；后运行时间：3min；进样量1μL。

②、质谱条件：

仪器：6540超高效液相色谱-串联三重四级杆质谱联用仪；

质谱条件：ESI+离子源；扫描范围100～3200Da；

扫描模式：多反应检测；

离子源参数：雾化气：50psi；干燥气：流速为14L·min^-1；干燥气温度：200℃；鞘气流速：11L·min^-1；鞘气温度：325℃；毛细管电压：4kV；碎裂电压：166V；二级质谱碰撞气：高纯氮气；

特征离子MRM采集参数如下：

乌龟的背甲及腹甲、鳖的背甲为正品；

巴西龟、花龟、黄喉拟水龟、黄缘闭壳龟、缅甸陆龟、小鳄龟、印度楞背龟的背甲及腹甲和佛罗里达鳖的背甲为伪品；

3)、数据计算分析：

取步骤1)所得的待测样品溶液1μL，注入超高效液相色谱-质谱联用仪，按照步骤2)设定的条件进行测定；并根据测定结果来判断待测样品是正品还是伪品。

3.根据权利要求2所述的同时鉴别10种龟鳖甲类中药的液质联用法，其特征在于所述步骤3)为：待测样品溶液按照步骤2)设定的条件进行测定，待测样品溶液的MRM提取离子流图色谱中，在如上表所示的10个品种相应的保留时间，同时获得该品种对应的2对特征肽提取离子流色谱峰，且信噪比大于3，认为检出该品种，反之，则判断为未检出该品种。

4.根据权利要求2或3所述的同时鉴别10种龟鳖甲类中药的液质联用法，其特征在于所述步骤1)为：

当待测样品为固体时：将待测样品粉碎，取1g粉碎后待测样品，加入50mL水，先室温浸泡1h，然后加热回流提取1h；回流提取液冷却至室温后，再加入NH₄HCO₃ 0.5g搅拌至溶解，静置，取上清液用0.22μm微孔滤膜过滤；取100μL滤液，加胰蛋白酶溶液10μL，混匀，37℃恒温酶解12h，得待测样品溶液；

当待测样品为液体时，在待测样品中加入碳酸氢铵搅拌至溶解，使碳酸氢铵的终浓度为1％，静置，取上清液用0.22μm微孔滤膜过滤，取100μL滤液，加胰蛋白酶溶液10μL，混匀，37℃恒温酶解12h，得待测样品溶液；

胰蛋白酶溶液的制备方法为：在质量浓度为1％的NH₄HCO₃水溶液1mL中，加入1mg胰蛋白酶并搅拌溶解，得胰蛋白酶溶液。