[发明专利]以羊乳种子为外植体建立羊乳再生体系用培养基及建立羊乳再生体系的方法

权利要求书

1.一种以羊乳种子为外植体建立羊乳再生体系的方法，所述方法基于一组培养基，所述培养基为：愈伤组织诱导增殖培养基、愈伤组织分化培养基、壮芽培养基和壮苗生根培养基；

所述愈伤组织诱导增殖培养基以MS或B5为基础培养基，添加蔗糖30g/L、琼脂7.0～7.5g/L、KT 0.5～1.5mg/L、NAA 0.1～0.5mg/L和多壁碳纳米管0.5～1.5mg/L；

所述愈伤组织分化培养基以MS或B5为基础培养基，添加蔗糖30g/L、琼脂7.0～7.5g/L、6-BA 0.5～1.0mg/L、NAA 0.2～0.6mg/L和多壁碳纳米管0.5～1.5mg/L；

所述壮芽培养基以MS为基础培养基，添加蔗糖40g/L、琼脂7.0～7.5g/L、6-BA 0.3～0.8mg/L、NAA 0.1～0.3mg/L和多壁碳纳米管0.5～1.5mg/L；

所述壮苗生根培养基以MS为基础培养基，添加蔗糖40g/L、琼脂7.0～7.5g/L、IBA 0.5～1.5mg/L和多壁碳纳米管2.0～4.0mg/L；

所述方法包括以下步骤：

1)将消毒后的种子接种在愈伤组织诱导增殖培养基上进行愈伤诱导培养，得到愈伤组织，将愈伤组织在新的愈伤组织诱导增殖培养基上进行增殖培养，得到增殖后的愈伤组织；

2)将步骤1)得到的增殖后的愈伤组织切块，接种到愈伤组织分化培养基上进行分化培养，得到丛生小苗；

3)将步骤2)得到的丛生小苗转接到壮芽培养基上进行壮芽培养，分切，得到单株试管苗；

4)将步骤3)得到的单株试管苗转接到壮苗生根培养基上进行壮苗生根共培养，得到试管苗；

5)将步骤4)得到的试管苗进行炼苗和移栽，得到再生羊乳。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述消毒前，还包括对种子进行洗涤，所述洗涤包括震荡洗涤20～30min，再用流水冲洗1.5～2h。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述消毒包括使用乙醇水溶液和氯化汞水溶液进行消毒。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述愈伤诱导培养、增殖培养、分化培养、壮芽培养和壮苗生根培养的过程中，温度为25±1℃。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述愈伤诱导培养、增殖培养、分化培养、壮芽培养和壮苗生根培养的过程中，光照强度为100～300μmol·m^-2·s^-1。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述愈伤诱导培养、增殖培养、分化培养、壮芽培养和壮苗生根培养的过程中，光照时间为16h/d。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3)所述壮芽培养后，单株试管苗的高度为4～6cm、叶片4～6片以上。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤4)所述壮苗生根培养后，试管苗的高度为6～7cm、叶片为6片以上、根数目为3～5条和根长度为0.8～1.2cm。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤5)所述移栽的基质包括泥炭土、珍珠岩和田园土，所述泥炭土、珍珠岩和田园土的体积比为(1.0～2.0):(0.5～1.0):(0.5～1.0)。