[发明专利]一种帕罗韦德起始物料及其对映异构体手性纯度的HPLC检测方法

说明书

本发明公开了一种帕罗韦德起始物料及其对映异构体手性纯度的HPLC检测方法，取帕罗韦德起始物料，用异丙醇溶解，配制成样品溶液，取5μL样品溶液注入液相色谱仪，完成帕罗韦德起始物料及其对映异构体的分离，检测手性纯度ee%值；本方法采用涂敷型多糖衍生物手性柱，正己烷/异丙醇正相色谱体系，等度洗脱进行分离，可以快速的分离帕罗韦德起始物料与其对映异构体，保证了帕罗韦德起始物料化学纯度ee%值的准确可靠性。

技术领域

本发明属于高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）方法，尤其是一种用HPLC检测帕罗韦德起始物料与其对映异构体分离的方法。

背景技术

帕罗韦德临床用于治疗新型冠状病毒肺炎（COVID-19），在其制备过程中的一种起始物料结构式为，其分子式为C₉H₁₅NO₂.HCl，化学名称为Methyl(1R,2S,5S)-6,6-dimethyl-3-azabicyclo[3.1.0]hexane-2-carboxylate-hydrochloride，该起始物料的分子中含三个手性碳原子，在通过定向合成目标化合物帕罗韦德的过程中需要控制该起始物料与其对映异构体的含量。

该起始物料的合成是定向合成目标化合物帕罗韦德的过程中非常关键的一步，且其手性纯度是控制该起始物料质量的一项重要指标，因此，实现该起始物料及其对映异构体的分离对帕罗韦德药物的合成过程中的质量控制有重要意义。

截止目前为止，市场上已有分离该异构体的方法，但是该方法在重现的过程中，发现方法耐用性极差，完全无法重现；或者涉及的GC手性色谱柱非国内现货，到货期长达6个月之久，严重影响效率。

发明内容

本发明的目的在于提供一种分离帕罗韦德起始物料与其对映异构体的HPLC检测方法，用于测定帕罗韦德起始物料的手性纯度ee%值。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种帕罗韦德起始物料及其对映异构体手性纯度的HPLC检测方法，检测条件为色谱柱：DAICEL CHIRALCEL OD-H，4.6*250mm，5μm手性柱，柱温为20℃；流动相：异丙醇：正己烷=15：85(v/v)，分离度最佳，流速为1.0 mL/min；洗脱程序：15%异丙醇等度洗脱10～15min；检测波长：210nm；包括以下步骤

（1），取帕罗韦德起始物料适量，用异丙醇溶解样品，配制成每1mL异丙醇含帕罗韦德起始物料约3mg的样品溶液；

（2），取步骤（1）的样品溶液按照进样体积5μL注入液相色谱仪，完成帕罗韦德起始物料及其对映异构体的分离，进行检测记录色谱图，从而检测手性纯度ee%值。

进一步，所述的色谱柱为涂敷型多糖衍生物手性柱。

更进一步，色谱柱是固定相表面涂敷了纤维素-三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)的球形硅胶的色谱柱。

进一步，所述的等度洗脱比例选用异丙醇：。

进一步，所述的液相色谱仪为Thermo Ultimate 3000，DAD检测器。

本发明的有益效果是：

本发明采用DAICEL CHIRALCEL OD-H，4.6*250mm，5μm手性柱，不仅提高了色谱峰的对称性，而且能有效分离帕罗韦德起始物料及其对映异构体；柱温选择20℃，缩短了分析时间。

本发明选择异丙醇溶解样品，能有效避免样品溶液在高比例的非极性流动相正己烷中析出的可能性。

本发明进样体积5μL，该体积可根据样品浓度大小适当调整，流速选择1.0mL/min，有效的节省了分析时间及试剂的消耗。