[发明专利]一种磷酸二酯酶BSP、生物制剂及其应用

说明书

本发明提供了一种磷酸二酯酶BSP、生物制剂及其应用，涉及基因工程技术领域。本发明提供了一种新型的磷酸二酯酶BSP，具有磷酸二酯酶活性和磷酸单酯酶活性，经实验显示，所述磷酸二酯酶BSP处理金黄色葡萄球菌的抑菌率达到67.63％，处理耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的抑菌率达到53.20％。同时，将所述磷酸二酯酶BSP与氯化锌和红霉素联用，对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的抑菌率达到95.2％，对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌具有显著的抑菌和杀菌功能。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，具体涉及一种磷酸二酯酶BSP、生物制剂及其应用。

背景技术

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是一种常见的革兰氏阳性致病菌，可以引起人和动物多种疾病。在畜牧养殖中，金黄色葡萄球菌感染可引起动物脓性皮炎、肺炎、乳房炎及全身性菌血症等，造成养殖业产量和效益的巨大损失。金黄色葡萄球菌感染类疾病的防治更为棘手的是金黄色葡萄球菌耐药菌株的大量出现。自1961年英国学者Jevons首次分离出耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcusaureus,MRSA)后，MRSA开始在世界范围内广泛被发现。MRSA具有多重耐药性，不仅对β-内酰胺类抗生素耐药，也对氨基糖苷类、大环内酯类、四环素类、氟喹喏酮类以及磺胺类抗生素有较强的耐药性，成为“超级细菌”，引起人畜相当高的发病率和死亡率。

解决MRSA感染一方面是不断发现新型的针对MRSA的抗生素，另一方面，通过抗生素辅助剂的使用，恢复MRSA的药敏性，如采用D-酪氨酸(姚泽明,等.2017)、丁香油(邱敏,等.2019)、地榆醇提物(Chen,etal.2015)等与β-内酰胺类抗生素联用可以对MRSA产生一定程度的抑制作用。然而，目前仍十分缺乏有效的化学或生物制剂强化抗生素作用以控制MRSA。

磷壁酸是革兰氏阳性细菌细胞壁的特有成分，它是由带有取代基的甘油磷酸或者核糖醇磷酸为单体通过磷酸二酯键连接而成的线性多聚体，其质量占细胞壁干重的50％。磷壁酸在革兰氏阳性致病菌的宿主定殖、肽聚糖合成及细胞分裂中发挥着重要作用(Atilano,etal.2010；Campbell,etal.2011)。新近的研究发现，磷壁酸还与MRSA菌株对抗生素的耐药性有关。而一些磷酸二酯酶类可以作用于革兰氏阳性菌磷壁酸骨架中的磷酸二酯键，产生游离的磷酸、甘油或者核糖醇，将磷壁酸的骨架结构破坏，具有这种作用的酶也被称为磷壁酸酶。2015年，第一个磷壁酸酶基因被鉴定(Myers,etal.2015)，该磷壁酸酶基因为枯草杆菌噬菌体φ29基因组中的GP12基因，GP12蛋白作为噬菌体φ29的一种附属蛋白，被证实可以降解磷壁酸。然而，目前能够降解磷壁酸的酶蛋白和基因的相关信息还很少，阻碍了细菌学的研究进展，缺少对由革兰氏阳性细菌引起的外伤感染的治疗和食入性疾病的防范的生物试剂。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种磷酸二酯酶BSP，具有磷酸二酯酶和磷酸单酯酶活性，对金黄色葡萄球菌的生长具有明显的抑制作用。

为解决上述技术问题，本发明提供了以下技术方案：

本发明提供了一种磷酸二酯酶BSP，所述磷酸二酯酶BSP的氨基酸序列如SEQ IDNO:1所示。

优选的，所述磷酸二酯酶BSP来源于枯草芽孢杆菌BGSC3A28菌株。

本发明提供了编码上述磷酸二酯酶BSP的基因，所述基因的核苷酸序列如SEQ IDNO:2所示。

本发明还提供了上述的磷酸二酯酶BSP在抑制金黄色葡萄球菌中的应用。

优选的，所述金黄色葡萄球菌包括耐药性金黄色葡萄球菌和非耐药性金黄色葡萄球菌。

更优选的，所述应用包括用于金黄色葡萄球菌引起的动物表皮感染和用于抑制金黄色葡萄球菌肠道感染的饲料添加剂。