[发明专利]一种细胞外囊泡纯化材料及纯化方法

权利要求书

1.一种细胞外囊泡纯化材料，其特征在于，所述纯化材料为纳米二氧化锆微球，所述纳米二氧化锆微球的制备方法包括以下步骤：

（1）二氧化锆前驱体的制备：将二氧化锆粉、第一份浓硫酸和硫酸铵进行混合并加热至溶解，放至室温后加入第二份浓硫酸，混合均匀，形成二氧化锆前驱体；所述二氧化锆粉、第一份浓硫酸、硫酸铵和第二份浓硫酸的重量体积比为0.09-0.11g：9-11ml：2-4g：18-22ml；

（2）A液的制备：聚维酮和十二烷基苯磺酸钠溶于去离子水中充分搅拌溶解，形成A液；聚维酮、十二烷基苯磺酸钠和去离子水的重量体积比为0.05g：2g：100ml；

（3）纳米二氧化皓微球制备：将步骤（2）得到的所述A液通入氮气，搅拌状态下加入步骤（1）得到的所述二氧化锆前驱体，再滴加入N,N-二甲基甲酰胺，反应完成后抽滤白色沉淀，用无水乙醇洗涤后干燥即得所述纳米二氧化锆微球；所述A液、二氧化锆前驱体、N,N-二甲基甲酰胺的体积比为7：3：2。

2.一种细胞外囊泡纯化材料，其特征在于，所述纯化材料为纳米二氧化锆磁性微球，所述纳米二氧化锆磁性微球的制备方法包括以下步骤：

采用权利要求1中的步骤1）制备二氧化锆前驱体；

采用权利要求1中的步骤2）制备A液；以及

步骤Ⅰ：四氧化三铁微球粉末的制备：将三氯化铁和硫酸亚铁溶于步骤（2）得到的所述A液中，充分搅拌至混合均匀，搅拌状态下滴加入饱和碳酸氢铵溶液，同时通入氮气搅拌并升温，温度升高到75-85℃时，滴加氢氧化钠溶液，观察液体变为纯黑色后继续在氮气氛围下搅拌混合，磁吸收获黑色沉淀，将所述黑色沉淀先用无水乙醇进行洗涤，再用去离子水洗涤后烘干，形成四氧化三铁微球粉末；所述烘干的温度为60℃；所述氢氧化钠溶液的浓度为1M；所述三氯化铁、硫酸亚铁、饱和碳酸氢铵溶液和1M氢氧化钠溶液的重量体积比为3.24g：2.78g：50ml：10ml；

和步骤Ⅱ：纳米二氧化锆磁性微球的制备：向步骤（2）得到的所述A液中加入步骤Ⅰ得到的所述四氧化三铁微球粉末，通入氮气，搅拌状态下加入步骤（1）得到的所述二氧化锆前驱体，继续搅拌至混合均匀，边搅拌边滴加 N,N-二甲基甲酰胺，滴加完成后，升温到35-45℃，氮气氛围下继续搅拌，磁吸褐色沉淀后，用无水乙醇洗涤所述褐色沉淀，烘干，即得所述纳米二氧化锆磁性微球；所述烘干的温度为100℃，所述烘干的时间为4小时；所述A液、四氧化三铁微球粉末、二氧化锆前驱体、 N,N-二甲基甲酰胺的重量体积比为70ml：2g：30ml：20ml。

3.一种细胞外囊泡纯化材料，其特征在于，所述纯化材料为多孔二氧化锆纳米微球，所述多孔二氧化锆纳米微球的制备方法包括以下步骤：

采用权利要求1中的步骤1）制备二氧化锆前驱体；

采用权利要求1中的步骤2）制备A液；以及

ⅰ：聚苯乙烯微球粉末的制备：将第一份苯乙烯和第一份过硫酸铵加入到步骤（2）得到的所述A液中，氮气氛围下充分搅拌并乳化，搅拌升温到45-55℃，滴加第二份苯乙烯，滴加完成后，再加入第二份过硫酸铵，升温到80-90℃，继续氮气氛围下搅拌至混匀，降温到45-55℃后，滴加氯化钠溶液，抽滤白色沉淀后，先用无水乙醇洗涤所述白色沉淀，再用去离子水进行洗涤，烘干，形成聚苯乙烯微球粉末；所述过硫酸铵的浓度均为200mg/ml；氯化钠溶液的浓度为2M；所述烘干的温度为60℃；所述第一份苯乙烯、第一份过硫酸铵、A液、第二份苯乙烯、第二份过硫酸铵和氯化钠溶液的重量体积比为30g：2.5ml：200ml：30g：2.5ml：20ml；

ⅱ：多孔二氧化锆纳米微球的制备：向步骤（2）得到的所述A液中加入步骤ⅰ得到的所述聚苯乙烯微球粉末，通入氮气，搅拌状态下加入步骤（1）得到的所述二氧化锆前驱体，继续搅拌至混合均匀，边搅拌边滴加 N,N-二甲基甲酰胺，滴加完成后，升温到35-45℃，氮气氛围下继续搅拌，抽滤白色沉淀后，用无水乙醇洗涤所述白色沉淀，烘干，即得所述多孔二氧化锆纳米微球；所述烘干的温度为100℃，所述烘干的时间为4小时；所述A液、聚苯乙烯微球粉末、二氧化锆前驱体、 N,N-二甲基甲酰胺的重量体积比为70ml：2g：30ml：20ml。

4.一种细胞外囊泡纯化方法，其特征在于，所述纯化方法为：采用权利要求1-3任一所述的纯化材料对细胞外囊泡进行纯化。