[发明专利]一种融合CXCR3和αFR抗体的嵌合抗原受体及其效应细胞和在治疗卵巢癌中的应用

说明书

本发明涉及嵌合抗原受体修饰免疫细胞疗法技术领域，具体涉及一种融合CXCR3和αFR抗体的嵌合抗原受体及其效应细胞和在治疗卵巢癌中的应用。融合CXCR3和αFR抗体的嵌合抗原受体，其编码核苷酸序列包括CXCR3基因序列、编码αFR的抗体的基因序列和编码CAR的基因序列。本技术方案通过将CXCR3和整合有αFR抗体的嵌合抗原受体结合，可以解决现有技术的CAR‑NK细胞的卵巢癌趋向性和治疗效果有限的技术问题。本技术方案可以使CAR‑NK细胞具有更强的卵巢癌趋向性以及杀伤作用，一定程度上缓解CAR‑NK细胞治疗卵巢癌时转运障碍的难题，并同时提高卵巢癌免疫治疗疗效，具有广阔的应用前景。

技术领域

本发明涉及嵌合抗原受体修饰免疫细胞疗法技术领域，具体涉及一种融合CXCR3和αFR抗体的嵌合抗原受体及其效应细胞和在治疗卵巢癌中的应用。

背景技术

卵巢癌是威胁全球女性健康的三大恶性肿瘤之一。由于卵巢癌发病隐匿，早期缺乏特异的症状和有效的发现策略，约70％卵巢癌患者就诊时已处于晚期，晚期卵巢癌预后极差，5年生存率小于25％。研究表明，在卵巢癌免疫抑制性肿瘤微环境(Tumor immunemicroenvironment，TME)中存在T细胞和自然杀伤细胞(Natural killer cells，NK)浸润，肿瘤浸润性免疫细胞情况直接影响卵巢癌患者预后。在癌症免疫治疗中，利用基因改造技术发展而来的嵌合抗原受体修饰T细胞即CAR-T治疗技术发展尤其迅猛。第一代CAR-T细胞仅包含单一的CD3ζ信号传递结构域，CAR-T细胞难以完全激活，故其通常表现为失能或扩增不良。第二、三代CAR-T细胞则分别包括一种或两种共刺激分子的信号传递结构域，标志着CAR-T细胞拥有更强的细胞因子分泌水平、扩增能力和细胞杀伤活性。CAR-T细胞疗法已在血液系统恶性肿瘤中取得了令人瞩目的成就。特别是靶向CD19的CAR-T细胞在急性淋巴母细胞白血病(Acute lymphoblastic leukemia，ALL)患者中的缓解率达到了70-90％。然而在实体瘤病例中，由于其特殊病理生理特征，包括靶抗原的异质性、TME固有的负性调节机制、CAR免疫细胞运输障碍等，均导致CAR免疫细胞疗法应用于非血液系统恶性肿瘤存在一定的限制。相较于CAR-T，选择脱靶毒性更低的免疫细胞如NK，以及优化CAR免疫细胞转运到肿瘤部位的策略可能会提高CAR细胞治疗实体瘤的疗效。

CAR-NK是将嵌合抗原受体(Chimeric antigen receptor，CAR)表达于NK细胞中，使之能通过CAR依赖的机制杀伤表达肿瘤相关抗原的靶细胞。与CAR-T细胞相比，CAR-NK细胞作用更广，不良反应更小，因此NK细胞是CAR的更优负载细胞。CAR-NK技术的关键在于寻找具有肿瘤特异性或相关性抗原。据相关文献报道，叶酸受体α(Folate receptorα，αFR)在90％的上皮性卵巢癌(Epithelial ovarian cancer，EOC)中呈现高表达而在正常组织中αFR不表达或限制性低表达且其表达水平不以化疗药物的应用而改变。因此，αFR被认为是卵巢癌靶向治疗的理想抗原。中国专利CN109796535A公开了靶向叶酸受体α的嵌合抗原受体及其在制备预防或治疗恶性肿瘤药物中的用途。在该技术方案中，靶向叶酸受体α的嵌合抗原受体的组成依次包括：人CD8α信号肽、结合叶酸受体α的多肽、人免疫球蛋白G1Fc段、人CD8α铰链区、人CD28跨膜段、人CD28胞内段、人CD137胞内段和人CD3ζ胞内段。将上述嵌合抗原受体导入NK-92细胞，可以特异性识别并杀伤叶酸受体α表达阳性的人肿瘤细胞系及人卵巢癌移植瘤模型。但是，现有技术的表达靶向叶酸受体α的嵌合抗原受体的NK-92细胞(CAR-NK细胞)仍然存在免疫细胞无法充分地激活以及迁移至肿瘤部位等问题，亟需对造成上述缺陷的原因进行研究，在一定程度上缓解CAR-NK细胞治疗卵巢癌时转运障碍的难题，使得CAR-NK细胞具有更强的卵巢癌趋向性以及杀伤作用，并同时提高卵巢癌免疫治疗疗效。

发明内容

本发明意在提供一种融合CXCR3和αFR的嵌合抗原受体，以解决现有技术的CAR-NK细胞的卵巢癌趋向性和治疗效果有限的技术问题。

为达到上述目的，本发明采用如下技术方案：