[发明专利]一种具有抑菌功能的RP23蛋白

说明书

本发明提供一种蛋白，其氨基酸序列包括SEQ ID NO.1或与SEQ ID NO.1具有90％以上一致性的序列；本发明还提供了用于编码所述的氨基酸序列的核苷酸序列SEQ ID NO.2‑4。本发明提供的蛋白对革兰氏阴性菌、革兰氏阳性菌及白色念珠菌等真菌均具有良好的抑菌效果；本发明提供的表达修复蛋白的核酸分子表达效率较高，尤其SEQ ID NO.2提供的核酸分子优于其他核酸分子的表达效率。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种具有抑菌功能的RP23蛋白。

背景技术

修复蛋白是一类具有抗菌活性的生物蛋白，其作用机理是能够与细菌的细胞膜表面相互作用，使膜的通透性发生改变，形成离子通道，导致细菌内容物溢出而死亡，所以修复蛋白对细菌不容易产生耐药性，因而有望成为新一代的抗菌类药品，在医药、畜牧养殖添加剂、食品添加剂等方向具有广泛应用价值。

目前市场上具有抗菌功能的蛋白开发过程中提取困难，化学合成成本高，且抗菌活性没有达到最理想的效价，还可能有细胞毒性等副作用，提示我们需要对传统抗菌蛋白分子进行适当修饰，以提高其抗菌效价、降低或消除其副作用。

中国专利201510064471.3中公开了一种杂合抗菌肽及其编码基因和应用，所述杂合抗菌肽包括串联连接的抗菌肽LfcinB和抗菌肽G13；该杂合抗菌肽具有更强的杀菌活性；该发明还提供了该杂合抗菌肽的真核表达系统，即将该杂合抗菌肽的编码基因导入酿酒酵母蛋白表达系统中，易于操作、安全无毒素、易于纯化、工艺简单、成本低廉，具有广阔的应用前景。但其仅对大肠杆菌和枯草芽孢杆菌表现出明显的抑菌活性，抗菌谱覆盖面较窄。

中国专利202010831482.0中公开了一种抗菌肽及其应用，属于生物技术领域。该抗菌肽是基于从牛中性粒细胞中分离得到的抗菌肽Indolicidin通过理性分子设计得到的，该发明提供的抗菌肽具有良好的结构特性，可显著提高对金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和黄曲霉的抑菌效果，同时有效降低鸡红细胞的溶血率和细胞毒性，可有效用于动物相关的生产活动中。但该多肽序列较短，不稳定性较强。

发明内容

为了解决上述问题，本发明基于BMAP 28(NCBI Reference Sequence:NP_776935.1)设计了一种RP23蛋白，其制备方法简便，抗菌活性高，且不易产生耐药性。

本发明中，“肽”指α-氨基酸以肽键连接在一起而形成的化合物，是蛋白质水解的中间产物。由21个以下氨基酸分子组成的肽叫“多肽”；21个以上氨基酸分子组成的叫“蛋白”。

本发明中，所述的“密码子简并性”指同一种氨基酸具有两个或更多个密码子的现象。特别是密码子第三位的胞嘧啶和尿嘧啶或鸟嘌呤和腺嘌呤的简并性常常等同。

本发明中，“重组表达载体”是指在载体骨架上插入相应的需要表达的蛋白的核酸分子构建出的能够表达相应蛋白的载体。通常来讲，载体骨架为质粒，也可以是其他形式的能够起到相同作用的载体骨架。所述的“重组表达载体”可以用于转染细胞并通过细胞进行蛋白的表达。

本发明中，“基因工程细胞”是指通过基因工程手段进行改造的细胞，所述的基因工程手段可以是质粒转化或者细胞融合等。

本发明中，“诱导剂”用于培养细胞时诱导表达蛋白，一般添加至培养细胞的培养液中完成诱导。

本发明中，“阳离子层析”又称阳离子交换层析，是指利用不同分子在所设计的条件(如pH、离子强度等)下，携带电荷情况不同，与阳离子交换剂结合的强度不同，可以用不同的条件洗脱出不同的组分的一种层析法。

本发明中，“亲和层析”又称亲和色谱层析、亲和色谱，是一种利用固定相的结合特性来分离分子的色谱方法。亲和色谱在凝胶过滤色谱柱上连接与待分离的物质有一定结合能力的分子，并且它们的结合是可逆的，在改变流动相条件时二者还能相互分离。