[发明专利]一种测定特殊医学配方食品中20种游离氨基酸和L-羟脯氨酸的方法

说明书

本发明公开了一种测定特殊医学配方食品中20种游离氨基酸和L‑羟脯氨酸的方法。样品经磺基水杨酸提取，以乙腈水‑甲酸铵为流动相梯度洗脱，UPLC HSS T3色谱柱高效分离，二极管阵列检测器检测，外标法定量。21种氨基酸在2~100µg/mL范围内线性关系良好。方法检出限(S/N≥3)为2mg/100g，定量限(S/N≥10)为5mg/100g，三个加标水平的加标回收率在73.5%~116.1%，相对标准偏差为1.6%~9.5%。方法简单高效、准确度高、重复性好，适用于特殊医学配方食品中20种游离氨基酸和L‑羟脯氨酸的定性、定量分析，为保障特殊医学配方食品的质量安全提供技术支持。

技术领域

本发明涉及一种测定特殊医学配方食品中20种游离氨基酸和L-羟脯氨酸的方法，属于食品检测技术领域。

背景技术

医用食品是为满足进食受限、消化吸收障碍、代谢紊乱或特定疾病状态人群对营养素或膳食的特殊需求，专门加工配制而成的配方食品。氨基酸作为合成蛋白质的重要原料，因其分子量小、易吸收常成为特医食品首选的营养添加剂，如若摄入不当，会影响人体的正常生命代谢，甚至导致各种疾病的发生。GB 29922-2013《食品安全国家标准 特殊医学用途配方食品通则》规定了21种可用于特殊医学配方食品中的氨基酸，L-羟脯氨酸被列入卫生部公布的《食品中可能违法添加的非食用物质和易滥用的食品添加剂品种名单（第二批）》。相关报道称，特殊医学用途配方食品中不应当随意添加氨基酸，特定人群对氨基酸种类及含量的摄入量必须严格控制。

目前，关于氨基酸的检测标准有GB 5009.124-2016《食品中氨基酸的测定》和SN/T3929-2014 《出口食品中L-羟脯氨酸的测定 液相色谱-质谱/质谱法》，其中GB 5009.124-2016中分析目标物仅限16种，未能覆盖GB 29922-2013附录B中规定的胱氨酸、瓜氨酸、鸟氨酸和谷氨酰胺。SN/T 3929-2014检测范围并不包括特殊医学配方食品。国内外文献报道的氨基酸检测对象大多为生物样品或普通食品，对特殊医学配方食品鲜有报道。由于特殊医学配方食品种类繁多、与普通食品基质差别较大，使得常规食品中检测氨基酸的检测手段在医用食品领域难以直接应用。因此，建立医用食品中通量检测氨基酸的方法十分必要。

调研文献发现，现有检测氨基酸的方法有茚三酮柱后衍生-氨基酸分析仪检测、衍生化反应-液相色谱仪检测和液相色谱-串联质谱法等，氨基酸分析仪检测目标物局限性强，仪器专用，实验室普及率低；液相色谱-质谱仪器本身价格昂贵，常采用的消除基质效应方式-同位素内标法也进一步提高了检测成本。普通液相色谱法检测氨基酸的手段应用较为普遍，但也存在缺陷，如使用5 μm色谱柱，柱效低，分析时间长；流动相采用N，N二甲基甲酰胺、三乙胺或者磷酸盐，对环境、色谱柱、仪器均不友好等。

基于氨基酸本身没有紫外吸收，需经过衍生化反应引入生色基团。相关文献中用于柱前衍生的试剂有6-氨基喹啉-N-羟基琥珀酰亚胺基氨基甲酸酯（AQC）、邻苯二甲醛（OPA）、异硫氰苯酯（PITC）、FMOC-Cl、丹磺酰氯（Dansyl-Cl)、DNFB等。其中，AQC与氨基酸反应快，副产物少，但是衍生试剂价格昂贵；OPA 衍生产物在室温不稳定，分解率高；PITC衍生氨基酸过程复杂，需要去除多余的试剂，且痕量的PITC会缩短分析柱的寿命； FMOC-Cl形成的衍生产物需萃取，且与组氨酸形成衍生物不稳定，影响定量；丹磺酰氯（Dansyl-Cl)反应速度慢，衍生产物不稳定，易生成多级衍生物；DNFB衍生技术虽然已有文献或资料报道，但也存在衍生时间长等缺陷。