[发明专利]一种基于过氧化氢的氧化应激体外评价模型及其构建方法和应用

说明书

本申请涉及皮肤氧化应激损伤的技术领域，具体公开了一种基于过氧化氢的氧化应激体外评价模型及其构建方法和应用。构建方法包括如下步骤：取对数生长期的HFF‑1细胞培养20~28h，后添加不同体积百分含量的H2O2；选择对HFF‑1细胞增殖有影响且细胞总存活率变化稳定H2O2添加量，构建得到评价模型。本申请的评价模型可用于探究H2O2在氧化应激体过程中的反应机制、筛选降低细胞氧化应激反应的原料和/或组合物和/或药物、筛选具有氧化应激损伤修复作用的化妆品原料和/或组合物和/或产品中、化妆品安全性和/或功效评价。该评价模型具有应用广泛、操作简单且结果稳定的优势。

技术领域

本申请涉及皮肤氧化应激损伤的技术领域，更具体地说，它涉及一种基于过氧化氢的氧化应激体外评价模型及其构建方法和应用。

背景技术

精油是一类由芳香植物的不同部位(花、芽、种子、叶、根、皮、枝、茎)提取得到的具有芳香气味、易挥发的油状液体，主要是芳香植物体内代谢产生的一类具有强烈气味的次生代谢物。精油常见于芳香疗法中，具有很好的抗炎、抑菌、抗氧化、清除自由基、美白等美容护肤功效。除芳香疗法外，精油还可作为功效原料，香精香料等广泛应用于食品、医药、化学、工业、农业等领域。

目前对精油的研究主要针对其成分分析、提取条件优化以提高功效等方面，其功效研究主要是集中在抑菌方面、神经舒缓方面和抑制癌症等辅助治疗方面。但是现在的中外文献较少涉及精油的抗氧化、抗炎功效机理的研究，且已有的功效评价文献较为单一，缺乏对其功效评价的深入研究和探讨。

氧化损伤和炎症是很多疾病的主要原因，大量天然的抗炎、抗氧化剂已经被用来治疗退行性疾病。炎症通常与氧化损伤有一定关联，许多可以抑制炎症的药物也可以作为抑制脂质氧化的药物，例如佛手柑精油和苦橙精油中的主要成分芳樟醇和乙酸芳樟酯。在抗氧化方面，大多数柑橘类精油都有一定的NO清除、DPPH自由基清除等功效。

但是在构建相关评价模型时，由于精油难溶于水，并且较难分散至体外细胞培养体系中，因此目前多利用动物模型或生化方法进行研究。同时，H₂O₂虽然是一种常用的氧化损伤刺激物，但因其较不易稳定，所以提供一种稳定的基于H₂O₂的稳定的氧化应激体外评价模型是必要的。

发明内容

为了能够基于体外细胞培养研究H₂O₂的氧化损伤，并提高研究体系的稳定性并简化研究过程，本申请提供一种基于过氧化氢的氧化应激体外评价模型及其构建方法和应用。

第一方面，本申请提供一种基于过氧化氢的氧化应激体外评价模型的构建方法，采用如下的技术方案：

一种基于过氧化氢的氧化应激体外评价模型的构建方法，所述构建方法包括如下步骤：

S1、将复苏后的HFF-1细胞经传代后，取处于数生长期的HFF-1细胞接种于E-plate16培养板，并在实时无标记细胞分析仪上培养20～28h后，添加不同体积百分含量的H₂O₂作用于 HFF-1细胞；

S2、通过实时无标记细胞分析仪监测HFF-1细胞生长曲线，选择对HFF-1细胞的细胞增殖造成有影响且HFF-1细胞总存活率变化较为稳定的所述H₂O₂添加的体积百分含量，构建所述评价模型。

通过采用上述技术方案，H₂O₂是机体常见代谢的产物之一，属于机体内活跃的活性氧自由基。H₂O₂也可作为外源刺激物诱导细胞发生氧化应激反应。因此，本申请通过构建H₂O₂对皮肤真皮细胞的氧化损伤模型，通过特定指标直观有效的变化来研究细胞氧化损伤，以及探究目标药物是否具有一定的抗氧化作用修复或者保护作用。该方法简单方便，且构建得到的评价模型的体系稳定。