[发明专利]一种利福霉素类药物中亚硝酸根离子的测定方法

说明书

本发明涉及药物检测技术领域，尤其涉及一种离子色谱法测定利福霉素类药物中亚硝酸根的方法。所述方法包括以下步骤：将供试品溶液进样，然后通过预处理柱保留主成分并洗脱出亚硝酸根离子，所述亚硝酸根离子保留于富集柱，然后采用淋洗液对所述富集柱进行洗脱，对洗脱出的亚硝酸根离子采用离子色谱法测定；所述预处理柱为NG1柱，所述淋洗液的洗脱方式为淋洗液梯度洗脱，所述淋洗液的浓度为5～42mM，流速为0.8～1.2mL/min。本发明提供的测定方法能够有效检测利福霉素类药物中的亚硝酸根离子，具有良好的线性、准确度、定量限和检测限。

技术领域

本发明涉及药物检测技术领域，尤其涉及一种离子色谱法测定利福霉素类药物中亚硝酸根的方法。

背景技术

遗传毒性杂质(GenotoxicImpurities，GTI)是指能够直接或间接损伤细胞DNA，造成DNA突变并伴有致癌性危害人类健康的物质。近年来，药物中发现亚硝胺类遗传毒性杂质事件层出不穷。药品评价性抽验对市场上生产、销售的利福平、利福喷丁的进行抽验，结果发现不同厂家生产的利福平、利福喷丁均检测出不同浓度的遗传毒性杂质1-甲基-4亚硝基哌嗪(MNP)或1-环戊基-4-亚硝基哌嗪(CPNP)。

遗传毒性杂质会对患者产生极大危害，极微量水平即可诱发DNA突变。因此对遗传毒性杂质的评价和限度控制分析至关重要。从杂质来源看，将杂质完全清除难以实现，也没有必要。只有通过合适的分析方法，并掌握杂质的成因才能对杂质的产生进行有效的控制，从而降低患者服用药物时对身体造成的危害，并为企业生产工艺的提升提供改进策略。申请人对利福平、利福喷丁中遗传毒性杂质的成因展开系统研究。亚硝胺类化合物产生的原因多样，包括药物合成中发生副反应，生成具有遗传毒性的N-亚硝胺类杂质，如仲胺类化合物与亚硝酸等亚硝化试剂相互作用；药物储存过程中发生氧化还原反应，如雷尼替丁中的结构中一个不稳定的二甲氨基，降解产生NDMA等。

根据利福平、利福喷丁与其遗传毒性杂质MNP、CPNP结构可知，利福平或利福喷丁中亚硝基中N原子有可能来源于活性成分或辅料总残留的亚硝化试剂亚硝酸根离子。因此很有必要对利福平或利福喷丁原料及制剂中的亚硝酸根离子含量进行检测，以确定亚硝胺杂质中N原子的来源，从而可以进行更好的质控。

目前，对于亚硝酸盐的测定通常采取离子色谱法、滴定法、比色法、紫外-可见分光光度法等。其中，离子色谱法具有简便、快速、灵敏、选择性高的特点，因此在药物和食品中亚硝酸检测中使用的较多。而采用传统的离子色谱法对利福喷丁及利福平中亚硝酸盐进行检测，由于利福喷丁和利福平极性较低，在离子色谱的淋洗液洗脱时容易析出并且较难从离子交换柱洗脱下来，从而缩短色谱柱使用寿命，降低灵敏度。

发明内容

为了解决以上技术问题，本发明提供一种离子色谱法测定利福霉素类药物中亚硝酸根的方法。

本发明提供的离子色谱法测定利福霉素类药物中亚硝酸根的方法包括以下步骤：将供试品溶液进样，然后通过预处理柱保留主成分并洗脱出亚硝酸根离子，所述亚硝酸根离子保留于富集柱，然后采用淋洗液对所述富集柱进行洗脱，对洗脱出的亚硝酸根离子采用离子色谱法测定；所述预处理柱为NG1柱，所述淋洗液的洗脱方式为淋洗液梯度洗脱，所述淋洗液的浓度为5～42mM，流速为0.8～1.2mL/min。

本发明通过上述测定方法能够有效检测利福霉素类药物中的亚硝酸根离子，通过采用NG1柱为预处理柱，使疏水性利福平或利福喷丁更好地保留在NG1柱中，而亚硝酸根离子流出保留在富集柱AG11-HC上，通过上述淋洗液将保留在富集柱上的亚硝酸根离子洗脱下来，能够明显提高测定的线性、准确度、定量限和检测限，更重要的是避免了原料药结合在离子交换柱，提高了色谱柱使用寿命。

发明人进一步发现，亚硝酸根在酸性条件下不稳定，因此也不能采用消解的方法去除基质的干扰。本发明采用了阀切换基质消除法，进一步建立了离子色谱测定利福平和利福喷丁中亚硝酸根离子的方法，为了进一步提高利福霉素类药物中的亚硝酸根离子检测效果，本发明对具体测定步骤及条件进行了优化，具体如下：