[发明专利]一种动物神经系统内皮细胞单细胞的分离方法

说明书

本发明公开了一种动物神经系统内皮细胞单细胞悬液的制备方法，属于生物技术领域。该方法包括：将切碎后的新鲜神经组织与细胞解离消化液混合培养后，离心，加入内皮细胞培养液，过滤后得到细胞混合物；将所述细胞混合物与细胞梯度分离液混合，纯化分离内皮细胞。该方法操作简便、成本低、效率高，且无需借助特定的仪器、适合工业化生产，通过该方法制备得到的神经内皮细胞单细胞可用来进行单细胞测序或者其他分析，有利于深入研究神经内皮细胞的特性。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种动物神经系统内皮细胞单细胞的分离方法。

背景技术

血管在神经活性方面发挥了举足轻重的作用。2001年美国国家神经疾病和中风研究所的一次会议中正式提出神经血管单元这一概念。之后，神经血管单元变成了神经科学中的一个热点领域。这些研究揭示了神经元的工作是一个多维的、高度协调的过程，需要多种细胞的参与并连接不同的信号通路。例如血脑屏障可以避免神经元受到血液中有害物质的损伤。但是神经系统中组成血管细胞最重要的神经内皮细胞是否与神经元相互作用及是否有不同的神经内皮细胞亚型参与中枢神经的功能如认知仍不甚清楚。神经系统内皮细胞作为神经系统中组成血管最重要的细胞，在很多疾病如中风、神经退行性疾病及精神类疾病中都发挥着重要的作用，研究其单细胞特性有助于我们全面了解神经系统内皮细胞的作用机制。

每个细胞都是独一无二的，越来越多的研究表明，每个细胞、即使是相同细胞系或个体来源的细胞，彼此的基因组、转录组和表观基因组都会有所差异。单细胞转录组学可以对细胞类型进行详细分类，是比较分析不同细胞类型功能的一种重要方法。Grubman等通过对阿尔兹海默症患者和健康人的内嗅皮层进行单细胞测序发现，和正常人相比，APOE基因在阿尔兹海默症患者内嗅皮层的寡突胶质前体细胞和星形胶质细胞中表达量显著性降低，而在小胶质细胞中的表达量却明显升高；Ximerakis等通过对年轻小鼠和老年小鼠的大脑进行单细胞测序发现，内皮细胞分泌的配体和星形胶质细胞上表达的受体之间的相互作用对衰老至关重要。这些结果都提示单细胞测序技术对我们精准地了解某一脑区不同细胞的功能及他们之间的相互作用都起到不可比拟的作用，但是目前尚未有专门针对哺乳动物神经组织中神经内皮细胞单细胞悬液进行制备的方法。

发明内容

本发明针对上述缺陷，提供一种动物神经系统内皮细胞单细胞悬液的制备方法。该方法操作简便、成本低、效率高，且无需借助特定的仪器、适合工业化生产，通过该方法制备得到的神经内皮细胞单细胞可用来进行单细胞测序或者其他分析，有利于深入研究神经内皮细胞的特性。

本发明通过以下技术方案实现：

本发明提供一种动物神经系统内皮细胞单细胞的分离方法，包括：

将切碎后的新鲜神经组织与细胞解离消化液混合培养后，离心，加入内皮细胞培养液，过滤后得到细胞混合物；

将细胞混合物与细胞梯度分离液混合，纯化分离内皮细胞；

其中，细胞梯度分离液是通过将第一溶液按照体积比1:0.9～1.1加到第二溶液的上方，第一溶液中含有质量浓度为8～10％的硅胶颗粒，第二溶液中含有质量浓度为12～14％的硅胶颗粒，硅胶颗粒中包覆有乙烯吡咯烷酮。

优选地，在本发明较佳的实施例中，第一溶液的配制方法为将含有硅胶颗粒的细胞分离液与内皮细胞培养液按照体积比13～17：183～187混合；

优选地，第二溶液的配制方法为将含有硅胶颗粒的细胞分离液与内皮细胞培养液按照体积比19～23：177～181混合；

细胞分离液中硅胶颗粒的质量浓度为1.2～1.4g/mL。

优选地，在本发明较佳的实施例中，纯化分离内皮细胞的步骤包括：