[发明专利]一种杜鹃热激转录因子Hsfs调控耐热能力的检测分析方法

权利要求书

1.一种杜鹃热激转录因子Hsfs调控耐热能力的检测分析方法，其特征在于，构建含有用于沉默耐热基因特异性片段的重组病毒载体，转化到农杆菌感受态细胞制备侵染菌液，将所述侵染菌液侵染的杜鹃，对所述耐热基因的功能进行鉴定分析，所述用于沉默耐热基因特异性片段为用于沉默RpHsfC-1like基因特异性片段或用于沉默RpHsfC-1基因特异性片段，所述用于沉默RpHsfC-1like基因特异性片段的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述用于沉默RpHsfC-1基因特异性片段的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.根据权利要求1所述的一种杜鹃热激转录因子Hsfs调控耐热能力的检测分析方法，其特征在于，包括如下步骤；

S1，提取杜鹃叶片RNA，反转录获得杜鹃cDNA；

S2，利用引物1和引物2对进行杜鹃cDNA片段PCR扩增，纯化获得用于沉默RpHsfC-1like基因特异性片段，利用引物3和引物4对进行杜鹃cDNA片段PCR扩增，纯化获得用于沉默RpHsfC-1基因特异性片段；

S3，将步骤S2中的用于沉默RpHsfC-1like基因特异性片段、用于沉默RpHsfC-1基因特异性片段分别与烟草脆裂病毒pTRV2进行重组连接，获得重组载体pTRV2-HsfC-1like、pTRV2-HsfC-1；

S4，将步骤S3中重组载体pTRV2-HsfC-1like、pTRV2-HsfC-1以及pTRV1分别转化到农杆菌GV3101感受态细胞，PCR鉴定阳性，分别获得含重组载体pTRV2-HsfC-1like的菌液、含重组载体pTRV2-HsfC-1的菌液以及含pTRV1的菌液；

S5，将步骤S4的含重组载体pTRV2-HsfC-1like的菌液、含重组载体pTRV2-HsfC-1的菌液分别与含pTRV1的菌液以体积比1：1混匀，即为侵染夜，将所述侵染液侵染杜鹃叶片；

S6，将侵染成功的杜鹃进行正常培养7天，后模拟自然高温条件进行高温胁迫处理，检测HsfC-1like、HsfC-1对在杜鹃的耐性响应中的功能，以及在杜鹃叶片光系统、光保护机制、电子传递对高温胁迫响应的作用。

3.根据权利要求2所述的一种杜鹃热激转录因子Hsfs调控耐热能力的检测分析方法，其特征在于，在步骤S2中，所述引物1的核苷酸序列为SEQ ID NO.3所示，所述引物2的核苷酸序列为SEQ ID NO.4所示。

4.根据权利要求2所述的一种杜鹃热激转录因子Hsfs调控耐热能力的检测分析方法，其特征在于，在步骤S2中，所述引物3的核苷酸序列为SEQ ID NO.5所示，所述引物4的核苷酸序列为SEQ ID NO.6所示。

5.根据权利要求2所述的一种杜鹃热激转录因子Hsfs调控耐热能力的检测分析方法，其特征在于，在步骤S4中，浸染方式如下：用无菌注射器在杜鹃叶片背部分别进行注射接种含重组载体pTRV2-HsfC-1like和pTRV1的菌液、含重组载体pTRV2-HsfC-1和pTRV1的菌液。

6.根据权利要求2所述的一种杜鹃热激转录因子Hsfs调控耐热能力的检测分析方法，其特征在于，在步骤S5中，所述高温胁迫处理的温度为40℃/32℃(昼12h/夜12h)。

7.根据权利要求2所述的一种杜鹃热激转录因子Hsfs调控耐热能力的检测分析方法，其特征在于，在步骤S5中，高温胁迫处理胁迫第5d后选取杜鹃新梢顶叶下的第3-4层叶片，进行功能验证。

8.根据权利要求2所述的一种杜鹃热激转录因子Hsfs调控耐热能力的检测分析方法，其特征在于，在步骤S5中，所述耐性响应中的功能分析包括叶绿素荧光参数、叶绿素荧光诱导曲线，所述杜鹃叶片光系统、光保护机制、电子传递对高温胁迫响应的作用包括JIP-test、延迟荧光DF、820nm反射光谱测定。