[发明专利]一种用于序贯治疗的纳米凝胶及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种用于序贯治疗的纳米凝胶及其制备方法和应用。该纳米凝胶是通过自组装方法将孟加拉玫瑰红（RB）和亚甲蓝（MB）包载于齐墩果酸（OA）纳米凝胶中，RB的荧光被MB淬灭。当纳米凝胶暴露于680 nm激光下时，MB发挥光热效果并被分解，RB释放出来，用于后续的声动力治疗。光声的序贯治疗能有效激活小鼠的免疫反应，与PD‑L1抗体联合后，可以有效清除残余的肿瘤细胞，抑制远端肿瘤的增长，在纳米医学领域具有重要的应用前景。

技术领域

本发明属于生物医药领域，涉及一种用于序贯治疗的纳米凝胶及其制备方法和应用。

背景技术

肿瘤免疫治疗，特别是免疫检查点抑制剂（ICB）能有效抑制肿瘤的生长，但副作用大、肿瘤免疫逃逸机制的多样化和免疫应答较弱等缺点限制了ICB在临床上取得理想疗效的能力。近年来，ICB联合其他微创治疗手段，如光动力疗法（PDT）、光热疗法（PTT）、声动力疗法（SDT）等，在实验室和和临床实验中取得显著成果。PTT 将近红外光的能量转化为热能，通过外部激光照射直接杀死癌细胞，已应用于不同癌症的高效无创治疗中。SDT利用具有组织穿透性的超声波（US），可以实现癌症诊断和非侵入性治疗。在外部超声波的激发下，声敏剂可以产生活性氧（ROS）杀死肿瘤细胞，而且对周围的正常组织没有损伤。

据报道，中央纤维化的三阴性乳腺癌（TNBC）即使具有较高的PD-L1表达，也对免疫检查点程序性死亡蛋白1及其配体（PD-1/PD-L1）抑制剂的反应较弱，整体表现为免疫抑制。这与纤维细胞产生丰富的胶原有关，胶原是构成细胞质基质（ECM）的重要成分之一。ECM成为物理屏障阻断药物的输送和免疫细胞的浸润，与免疫逃避和免疫治疗失败有关。而PTT和SDT作为一种微创治疗手段，可以直接或间接的激活免疫应答，启动免疫反应。例如，PTT或SDT处理后的肿瘤细胞会释放“吃我”的信号，促进树突细胞的成熟。同时，PTT和SDT都可以减弱肿瘤部位的纤维化程度，促进肿瘤部位的T细胞浸润。因此，联合ICB与光声治疗，有望提高ICB的治疗效果。

通过纳米药物递送系统，可以将药物设计成具有不同尺寸、形状和物理化学特性的纳米药物，能有效递送药物到达肿瘤部位，应用于联合治疗。齐墩果酸（OA）是天然植物中的一种五环三萜类化合物，可以在乙醇/水的混合溶剂中自组装形成纳米凝胶，用于递送其他药物。同时，OA可通过 TGF-β/Smad 信号通路减弱肿瘤部位的纤维化，重塑肿瘤微环境，促进免疫细胞的浸润。

因此，本发明利用OA自组装的特性，递送RB和MB，用于肿瘤的序贯治疗，纳米凝胶在激光照射下，发挥光热效果，并释放声敏剂RB用于后续的声动力治疗，同时，PTT/SDT能减少肿瘤部位的纤维化，激活免疫应答，联合PD-L1抗体可清除近端的肿瘤细胞，抑制远端肿瘤的增长。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于序贯治疗的纳米凝胶及其制备方法和应用。具体的，本发明以齐墩果酸、孟加拉玫瑰和亚甲基蓝为原料，构建了一种具有程序性释放药物特性的纳米凝胶，其可用于肿瘤的光声和免疫治疗。

为达到上述目的，本发明采取了如下技术方案：

本发明首先提供了一种齐墩果酸纳米凝胶的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：

1）将孟加拉玫瑰红和亚甲蓝分别溶解在水中，分别得到孟加拉玫瑰红的水溶液和亚甲蓝的水溶液；

2）将齐墩果酸溶解在乙醇中，得到齐墩果酸的乙醇溶液；

3）将步骤1）得到的孟加拉玫瑰红水溶液和亚甲蓝水溶液混合均匀，得到孟加拉玫瑰红和亚甲蓝的混合水溶液，在涡旋状态下向其中滴加步骤2）得到的齐墩果酸乙醇溶液，室温静置，离心，所得到的淡紫色果冻状沉淀即为所述纳米凝胶。

其中，上述步骤1）中，所述孟加拉玫瑰红水溶液的浓度范围为0.1~2000 μg/mL。

上述步骤1）中，所述亚甲蓝的水溶液的浓度范围为0.1~2000 μg/mL。