[发明专利]一种用于皮肤损伤修复的间充质干细胞及其制备

说明书

本发明提供了一种用于皮肤缺损修复的MSCs‑水凝胶复合物及其制备。用带标签基因的shPDCD4质粒包装制备慢病毒，然后感染MSCs细胞，抗性筛选后获得稳转细胞系shPDCD4‑MSCs；将水凝胶与shPDCD4‑MSCs细胞系混合后获得PDCD4基因缺失的MSCs水凝胶复合材料。本发明提出一种PDCD4敲减的MSCs水凝胶的复合材料的制备方法，用于皮肤缺损的治疗和修复，并结合实施例说明本发明方法在皮肤缺损治疗和修复中的应用。本发明提出的细胞‑水凝胶复合材料的制备方法简单，具有较好的组织相容性和皮肤修复功能，在皮肤组织工程和再生医学领域具有广阔的应用前景。

技术领域

本发明属于组织工程和再生医学领域，具体涉及一种MSCs-水凝胶复合物，特别涉及一种PDCD4基因敲减的MSCs-水凝胶复合物及其制备方法。

背景技术

组织缺损性疾病是临床工作中的难点，其中皮肤损伤是较为常见的症状，常面临难以愈合、组织来源缺乏、手术难度大、免疫排斥等难题。严重创伤、大面积烧伤、糖尿病创面等皮肤损伤后创面愈合是一个重要的问题，除利用患者自身皮肤组织外，临床已采用过同种皮、异种皮、人造皮、以及其他生物膜等材料来覆盖创面。但由于这些材料的排异性使其应用受到一定限制，且最终将脱落由移植的自体皮增殖覆盖而达到创面愈合。提高皮肤损伤的修复有助于促进愈合、减少畸形及相关并发症的出现，显著提高患者的生活质量。

间充质干细胞（mesenchymal stem cells, MSCs）作为种子细胞促进皮肤损伤修复方面的研究越来越受到人们的重视。MSCs为来源于中胚层、具有多向分化潜能及自我更新能力的成体干细胞，能向成骨细胞、成软骨细胞、平滑肌细胞、神经细胞、血管内皮细胞等分化，在组织损伤时可趋化至损伤组织处发挥组织修复、分泌细胞因子、免疫调节、促进血管生成等作用。损伤部位MSCs募集、增殖及分化为组织细胞在组织修复过程中发挥重要作用。骨髓MSCs具有高度的分化潜能，易分离培养和扩增，外源基因易转染和表达，可避免排斥反应，使其具有重要的研究和应用前景，特别在细胞治疗和基因治疗中有重要临床应用价值，被认为是组织工程、细胞及基因治疗理想的靶细胞。然而，单纯的种子细胞能力有限，已不足以满足临床需要，故对种子细胞进行基因修饰及结合生物支架材料成为解决目前面临难题的重要手段。

程序性细胞死亡4（programmed cell death 4, PDCD4）是经典的抑癌和蛋白质翻译抑制基因，也可抑制基因转录，在多种实体肿瘤中发挥一定的抑癌作用。近年来发现PDCD4不仅发挥抑癌基因的作用，还参与免疫反应的调控，借此参与自身免疫性或炎症反应性疾病的发生机制。PDCD4是miR-21最主要的下游靶基因，miRNA与靶mRNA的3’-UTR特异性结合，使其发生降解或翻译抑制。2017年印度的一项流行学调查发现，miR-21在砷诱导的皮肤损伤的暴露人群中表达明显上调，而PDCD4则明显下调，说明miR-21/PDCD4轴在皮肤损伤过程中发挥重要作用。

在组织工程中，细胞-支架复合材料的制备是关键环节，细胞在支架表面的粘附、生长和增殖受多种因素的制约，复合材料与组织的生物相容性也是影响组织修复效果的重要因素。因此，需要提供一种具有良好生长性能的细胞-支架复合材料以提高皮肤缺损修复效果。

发明内容

针对目前细胞-支架复合材料粘附、生长和增殖不好，皮肤缺损修复效果欠佳的问题，本发明提供一种PDCD4基因敲减的MSCs-水凝胶复合材料，复合材料中细胞生长、增殖好，可有效提高皮肤缺损修复效率。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案。

一种PDCD4基因敲减的MSCs（间充质干细胞）在制备皮肤损伤修复药物中的应用。

所述用于PDCD4基因敲减的靶标序列如SEQ NO ID:1或SEQ NO ID:2所示。

优选的，所述用于产生shRNA的核苷酸序列包含如SEQ NO ID:3和SEQ NO ID:4或SEQ NO ID:5和SEQ NO ID:6所示的核苷酸序列。