[发明专利]一种干细胞水凝胶及制备方法、冷冻保存方法和复苏方法

权利要求书

1.一种干细胞水凝胶，其特征在于，所述干细胞水凝胶呈片状结构，厚度为1～2mm。

2.权利要求1所述的干细胞水凝胶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)制备厚度为1～2mm的PMMA模片，将PMMA模片固定于PMMA板的上表面，得到模板；

(2)将PDMS溶液浇铸在模板上，模板上PDMS溶液的上表面高出PMMA模片的上表面，真空脱气后，固化，脱模，得到模具；

(3)将含干细胞的凝胶悬液倒入模具，在模具上表面铺放一张半透膜，将交联溶液倒在半透膜上，交联溶液渗透完成后，去除半透膜，得到片状的干细胞水凝胶。

3.根据权利要求1所述的干细胞水凝胶的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，含干细胞的凝胶悬液通过如下方法得到：

将非渗透性保护剂加入到凝胶溶液中，过滤除菌，得到含非渗透性保护剂的凝胶溶液；

将培养的干细胞重悬于含非渗透性保护剂的凝胶溶液中，得到含干细胞的凝胶悬液。

4.根据权利要求3所述的干细胞水凝胶的制备方法，其特征在于，所述的凝胶溶液为海藻酸钠-多巴胺溶液，其中的溶剂为干细胞用培养基。

5.根据权利要求3所述的干细胞水凝胶的制备方法，其特征在于，所述的干细胞为脂肪间充质干细胞、脐带间充质干细胞、骨髓间充质干细胞和胎盘间充质干细胞的任一种，所用干细胞的代数为P3～P6代。

6.根据权利要求3所述的干细胞水凝胶的制备方法，其特征在于，所述的非渗透性冷冻保护剂为海藻糖、蔗糖、棉子糖、甘露醇、半乳糖、聚乙二醇和聚乙烯醇中的任一种。

7.根据权利要求3所述的干细胞水凝胶的制备方法，其特征在于，所述的交联溶液为氯化钙溶液，交联时间为5～15min。

8.权利要求1所述干细胞水凝胶的冷冻保存方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将干细胞水凝胶置于渗透性冷冻保护剂溶液中，在4～10℃静置15～30分钟；所述的渗透性冷冻保护剂为DMSO、1,2-丙二醇、甘油和3-OMG中的一种或多种，其中，当渗透性冷冻保护剂包含DMSO时，DMSO在渗透性冷冻保护剂溶液中的质量浓度为4％～5％；

(2)对干细胞水凝胶以0.5～5℃/min的速度进行梯度降温，直至降至-80℃～-196℃，然后转移至液氮中保存。

9.一种冷冻保存的干细胞水凝胶的复苏方法，其特征在于，所述冷冻保存的干细胞水凝胶是采用权利要求8所述方法得到的干细胞水凝胶，包括以下步骤：

(1)将冷冻保存的干细胞水凝胶置于37℃的水浴中复温；

(2)将复温后的干细胞水凝胶转移至无血清培养基溶液中洗脱。

10.根据权利要求9所述的冷冻保存的干细胞水凝胶的复苏方法，其特征在于，步骤(2)中，洗脱时间为10～30分钟。