[发明专利]一种绿洲1号菌草的组培快繁方法

权利要求书

1.一种绿洲1号菌草的组培快繁方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)培养材料选取：

选取菌草绿洲1号优株，采集生长旺盛部位的嫩枝前端的带节茎段作为培养材料；

(2)外植体处理及消毒：

将培养材料剥离表皮、去除叶片，自来水冲洗10min去掉表面污渍，用解剖刀切分成2～3cm的带节茎段，转入超净工作台，在2％NaClO中振荡消毒4-12min，用无菌水漂洗5次，每次30s，随后在无菌滤纸上吸干水分，用解剖刀切除两端0.3～0.5cm，并在茎节膨起处螺旋切割使其出现新创面，后立即用镊子接种；

(3)启动培养：

在基本培养基中均附加配备比为6-BA5.0mg/L+0.2mg/L2,4-D+NAA0.2mg/L的诱导腋芽激素制成启动培养基，将经消毒处理的外植体接种于启动培养基中进行腋芽诱导；

(4)增殖培养：

将启动培养中生长健壮、长势一致的无菌单芽转接到以MS为基本培养基含有激素的增殖培养基中；

(5)生根培养：

选取增殖培养中长势健壮的丛生芽3～5cm，转接到添加添加剂的MS生根培养基中进行培养，培养基中添加30g/L蔗糖、6.5g/L琼脂粉，将pH值调至6.0，加入激素后配制分装，在121℃下高压蒸汽灭菌20min，接种后放置于培养箱中，温度：22-28℃，光照强度：2500～3000lx，光周期12h/d，相对空气湿度50％～60％；

(6)驯化移栽：

将株高约10cm、根长1～4cm且生长健壮的绿洲1号组培苗在培养箱内拧松瓶盖1～2天，再全部开盖，移置自然光照下通风适应约5d，每天喷水3次保湿，移栽前用20～22℃水洗去根部残留培养基。在10％多菌灵溶液中浸泡组培苗根部10min，再次冲洗后分别栽入经0.1％高锰酸钾充分消毒的基质中移栽后置于小拱棚内养护，采用自动喷雾装置喷水保持空气湿度60～80％，同时适当通风。

2.根据权利要求1所述的一种绿洲1号菌草的组培快繁方法，其特征在于：所述步骤2中茎节上下保留1cm。

3.根据权利要求2所述的一种绿洲1号菌草的组培快繁方法，其特征在于：所述步骤4中激素为6-苄氨基嘌呤，并添加2，4-二氯苯氧乙酸、吲哚-3-乙酸或萘乙酸中的一种。

4.根据权利要求3所述的一种绿洲1号菌草的组培快繁方法，其特征在于：所述步骤5中所述添加剂为NAA、IBA、IBA+NAA或土豆滤液中的一种。

5.根据权利要求4所述的一种绿洲1号菌草的组培快繁方法，其特征在于：所述土豆滤液制备方式为选用无病毒侵害、表面完整且无发芽迹象市售土豆，切片煮熟后用纱布过滤，滤液备用。

6.根据权利要求5所述的一种绿洲1号菌草的组培快繁方法，其特征在于：所述步骤6中基质为下列组分中的一种：河沙：蛭石＝1：1；草炭土：蛭石＝1：1；蛭石：珍珠岩＝1：1；河沙：草炭土：珍珠岩＝2：1：1；河沙：蛭石：珍珠岩＝2：1：1。