[发明专利]一种L-α-甘油磷酰胆碱中微量位置异构体杂质的检测方法

说明书

本发明涉及一种通过定量核磁共振磷谱检测L‑α‑GPC中位置异构体杂质β‑GPC的方法，其特征在于，所述方法使用氧化氘作为溶剂，且使用以磷酸三甲酯作为内标物的内标法，或以β‑GPC为对照品的外标法。该方法具有较好的专属性、重复性及准确性，而且无复杂的样品预处理，为进一步提升L‑α‑GPC的质量控制要求提供了重要参考依据。

技术领域

本发明属于L-α-甘油磷酰胆碱分析检测领域，具体涉及一种定量核磁共振磷谱法检测L-α-甘油磷酰胆碱(简称L-α-GPC)中微量位置异构体杂质β-甘油磷酰胆碱(简称β-GPC)的方法。

背景技术

有关物质是药物质量控制的关键指标，主要包括了反应起始物、中间体、副产物及降解物质等。为了保证药物在临床应用中的质量安全性，各国监管机构及人用药品注册技术要求国际协调会议(International Council for Harmonization，ICH)均制定了相关的指导原则，通常规定有关物质的控制限度为0.1％。

L-α-甘油磷酰胆碱(L-α-glycerylphosphorylcholine，L-α-GPC)的结构式如下：

L-α-GPC作为人的机体内源性的水溶性小分子物质，能够有效预防和治疗阿尔兹海默氏症与多发性脑梗死性痴呆等神经性疾病，目前已在意大利、韩国、德国等多个国家上市。

L-α-GPC的有关物质主要包括了起始物料磷酰胆碱(PC)，降解产物甘油磷酸酯(GP)以及副产物L-α-甘油磷酰乙醇胺(L-α-GPE)和β-甘油磷酰胆碱(β-GPC)。由于L-α-GPC及其有关物质具有极性大，难挥发且无紫外吸收等特点，文献中主要采用了高效液相色谱法，并联用示差折光检测器或者蒸发光散射检测器对其有关物质进行检测。其中值得关注的是，β-GPC作为L-α-GPC位置异构体，与L-α-GPC并没有实现很好的色谱分离，给微量β-GPC的准确定量带来挑战。因此需要建立一种可以准确测定L-α-GPC中微量位置异构体杂质的检测方法。

β-GPC结构式如下：

发明内容

发明人在现有技术的基础上试验了许多种试剂、溶剂和实验参数，发现只有在特定的试剂、溶剂和参数的情况下才能准确定量并完全分离β-GPC与L-α-GPC的谱峰，并在此基础上完成了本发明。因此，本发明的目的是提供一种定量核磁共振磷谱法，可以使β-GPC与L-α-GPC的谱峰完全分离，能够实现L-α-GPC中微量位置异构杂质β-GPC的准确定量，由此可以确保GPC产品的质量。

为实现以上目的，本发明采用的技术方案为：

一种使用核磁共振波谱仪通过定量核磁共振磷谱检测L-α-GPC中位置异构体杂质β-GPC的方法，其特征在于，该方法使用氧化氘作为溶剂，且使用以磷酸三甲酯作为内标物的内标法，或以β-GPC为对照品的外标法。

根据本发明的一个实施方式，其中

所述内标法包括：

步骤1：称取内标物磷酸三甲酯溶于氧化氘中摇匀，得内标储备液备用；

步骤2：称取样品溶于氧化氘中，加入内标储备液，再用氧化氘定容，得样品溶液备用；

步骤3：取步骤2中的样品溶液采集核磁信号，获得的β-GPC和磷酸三甲酯峰面积采用以下内标法公式(1)计算β-GPC的含量：