[发明专利]抗H3N2流感病毒血凝素蛋白单克隆抗体ZJU32-01及其在检测中的应用

说明书

本发明提供抗H3N2流感病毒血凝素蛋白的单克隆抗体ZJU32‑01及其在检测中的应用。一种抗H3N2流感病毒血凝素蛋白单克隆抗体ZJU32‑01，该单克隆抗体亚型为IgG1、κ型，能与H3N2流感病毒血凝素蛋白抗原特异结合。抗体的重链氨基酸序列如SEQ ID No.2，轻链氨基酸序列如SEQ ID No.4所示。对该单克隆抗体进行进一步的理化性状分析和鉴定，并建立了以该单克隆抗体为探针通过免疫荧光技术检测H3N2流感病毒的方法。本发明为临床样本中H3N2季节性流感病毒感染的辅助诊断提供了有效的工具，并可推广应用于多种检测技术以及临床和实验研究。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及抗H3N2流感病毒血凝素蛋白单克隆抗体的制备及应用，是利用细胞工程、抗体工程技术，获得分泌抗血凝素蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞系，通过同品系的小鼠诱导腹水，制备抗血凝素蛋白的单克隆抗体ZJU32-01，鉴定为IgG1、κ型，再通过亲和纯化、电泳、免疫等技术实现对该抗体的应用。

背景技术

目前，与人类季节性流感感染密切相关的流感病毒主要包括两种甲型流感病毒(H1N1和H3N2)和两种谱系(Victoria系和Yamagata系)的乙型流感病毒。据统计，季节性流感每年可导致全球65万人死亡，对公众健康和社会经济带来严重的影响。当前流感疫苗接种仍然是预防流感病毒感染的最佳方法。但是由于流感疫苗与流行病毒株的不匹配等原因，2004年至2015年期间流感疫苗针对H3N2流感病毒感染的有效性仅为33％。因此快速明确实验室诊断、对流感病毒准确分型，可以加深临床对流感流行和致病力的认识，提高流感病例的诊疗效果。

当前最常用的甲型流感病毒检测方法是基于核酸序列的特异性检测方法，例如逆转录PCR。然而，许多实验室可能不具备进行分子检测的能力，更愿意采用技术要求较低的检测方法来识别甲型流感病毒亚型。用于亚型分型的传统血凝抑制试验是一种耗时且繁琐的方法。

当前甲型流感病毒感染的诊断方法主要包括病毒分离鉴定、血清学方法和分子生物学方法，如逆转录酶聚合酶链反应和实时定量聚合酶链反应。但是上述方法都需要特殊设备和条件，对于某些条件落后的地区并不适合。已有许多研究开发了针对不同亚型的特异性单克隆抗体，并试图将其用于临床检测。因此，本发明旨在说明一株针对H3N2甲型流感病毒的特异性单克隆抗体，并将其与免疫荧光技术结合，可以对样本中H3N2季节性流感病毒株进行检测。

综上所述，开发H3N2流感病毒单克隆抗体，用于快速灵敏检测方法的建立迫在眉睫。基于以上背景，本项目选定血凝素蛋白为靶抗原，采用融合杂交瘤技术建立稳定分泌抗血凝素蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞系，并大量制备、纯化和鉴定这些单克隆抗体。该单克隆抗体的获得为建立H3N2季节性流感病毒免疫学诊断方法奠定物质基础，同时对疾病发病机理、预后及疗效判定等方面的研究起到重要作用。

本发明用到杂交瘤细胞技术。该技术将免疫小鼠的B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合，以建立分泌均质抗体的杂交瘤细胞系，也称为单克隆抗体技术。该技术涉及到动物免疫、细胞培养、细胞融合、细胞克隆培养和免疫测定等一系列方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种抗H3N2流感病毒血凝素蛋白单克隆抗体，能识别H3N2流感病毒。该单克隆抗体亚型为IgG1、κ型，命名为ZJU32-01，能特异性识别流感病毒的血凝素蛋白。

SEQ ID No.1

Heavy chain:DNA sequence(351bp)

Signal sequence-FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4

CAGGTTCAACTACAGCAGTCTGGAGCTGAGCTGATGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGA

TATCCTGCAAGGCTACTGGCTACATATTCAGTAGCTACTGGATAGAATGGGTAAAGCAG