[发明专利]检测牛奶和乳制品中A1β-酪蛋白和A2β-酪蛋白含量的方法

权利要求书

1.一种检测牛奶和乳制品中A1β-酪蛋白和A2β-酪蛋白含量的方法，其特征在于，包括：

利用嗜热菌蛋白酶对待测牛奶或乳制品进行酶切处理，以便得到酶切后的蛋白待测液；以及

利用液相色谱串联质谱系统对所述酶切后的蛋白待测液进行检测，基于特征肽段的检测信息，以便获得所述牛奶或乳制品中A1β-酪蛋白和A2β-酪蛋白的含量。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述嗜热菌蛋白酶与所述待测牛奶或乳制品中蛋白质的质量比为1：10-25，优选地，为1:20。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述酶切处理的时间为3-6小时。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述酶切处理是在50-70℃条件下进行的，优选为60℃。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述A1β-酪蛋白的所述特征肽段的氨基酸序列包括SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列，

任选地，所述A2β-酪蛋白的所述特征肽段的氨基酸序列包括SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述特征肽段的检测信息为所述特征肽段的质荷比，

任选地，所述A1β-酪蛋白的所述特征肽段第一同位素的质荷比为1229.66±0.2、615.34±0.2或410.56±0.2，

任选地，所述A2β-酪蛋白的所述特征肽段第一同位素的质荷比为1947.04±0.2、974.03±0.2，649.68±0.2。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述液相色谱串联质谱系统的液相色谱检测条件为：

色谱柱：C18色谱柱；

流速：100μL/min-500μL/min，优选地，300μL/min。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述液相色谱-串联质谱系统的质谱检测条件为：

所述A1β-酪蛋白的所述特征肽段的检测条件：

电喷雾电离(ESI)正离子模式；

离子源电压：3.5kV；

鞘气流量：5arb；

辅助气流量：20arb；

毛细管管温度：275℃，

所述A2β-酪蛋白的所述特征肽段的检测条件：

离子源电压：3.6kV；

鞘气流量：5arb；

辅助气流量：0arb；

毛细管管温度：325℃。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述液相色谱-串联质谱系统的液相色谱流动相：A：0.1体积％甲酸水溶液，B：0.1体积％甲酸乙腈溶液。

10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述液相色谱-串联质谱系统的液相色谱为梯度洗脱，

任选地，所述梯度洗脱的洗脱条件为0-25分钟，5-55％B；25-26分钟，55-60％B；26-36分钟，60％B；36-37分钟，60-95％B；37-40分钟，95％B。