[发明专利]脆弱拟杆菌荚膜多糖A与PD-1及PD-L1抗体联合治疗呼吸系统肿瘤的应用

权利要求书

1.一种脆弱拟杆菌两性离子荚膜多糖与免疫检查点抑制剂在制备协同预防和/或治疗呼吸系统肿瘤的药物中的应用，其特征在于，所述脆弱拟杆菌为保藏编号为CGMCCNo.10685的脆弱拟杆菌ZY-312；

所述免疫检查点抑制剂为PD-1抗体和/或PD-L1抗体；

所述呼吸系统肿瘤是喉癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌；

所述两性离子荚膜多糖含荚膜多糖A，所述荚膜多糖A的结构如下所示：

所述荚膜多糖A的重均分子量为80-90kDa。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，

所述两性离子荚膜多糖中荚膜多糖A的含量超过95wt％。

3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述两性离子荚膜多糖的制备方法包括以下步骤：

(1)将发酵培养后的脆弱拟杆菌菌液离心收集沉淀物，即得脆弱拟杆菌菌泥；取菌泥，加入菌泥质量3～10倍的纯化水使菌体重悬，用酸溶液调节其pH至2.0～4.5，50～120℃提取0.5～3.0h，冷却至室温，常温离心，取上清，得到粗糖溶液；

(2)粗糖溶液经超滤膜超滤浓缩、除小分子杂质，至电导率稳定，收集回流液；

(3)回流液中加入等体积40mmol/L Tris-HCl转盐；离子交换柱层析，梯度洗脱，分段收集，SEC-HPLC跟踪监测，合并206nm吸收峰为单一、对称峰的组分，超滤膜超滤，加入纯化水反复超滤，至电导率稳定，收集回流液，冻干，得到脆弱拟杆菌两性离子荚膜多糖。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，

步骤(1)中所述离心为11000～13000g离心8～12min；

和/或，步骤(1)中所述酸溶液是有机酸、无机酸和酸性缓冲液中的一种或多种；

和/或，步骤(2)中所述超滤膜为100、50、30、10、5、3KD或者任意上述两个分子量值之间的范围；

和/或，步骤(3)中所述离子交换柱为DEAE Sepharose Fast Flow的16mm×200mm，层析时的流速15～25mL/min，pH5.0～9.0含0.2mol/L NaCl的20mmol/L Tris-HCl梯度洗脱25个柱体积，分段收集，100mL/瓶；所述超滤膜为10KD。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，

无机酸是盐酸、硫酸、磷酸；有机酸是乙酸、柠檬酸。

6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述PD-1抗体包括纳武利尤单抗(Nivolumab)、帕博利珠单抗(Pembrolizumab)、西米普利单抗(Cemiplimab)、特瑞普利单抗(Toripalimab)、信迪利单抗(Cindilimab)、卡瑞利珠单抗(Camrelizumab)及其他能够与PD-1结合，阻断PD-1/PD-L1信号通路，上调T细胞活化，激活内源性抗肿瘤免疫反应的物质；

和/或，所述PD-L1抗体包括阿特朱单抗(Atezolizumab)、阿维鲁单抗(Avelumab)、度伐鲁单抗(Durvalumab)及其他能够与PD-L1结合，阻断PD-1/PD-L1信号通路，上调T细胞活化，激活内源性抗肿瘤免疫反应的物质。