[发明专利]一种基于磁珠法的高通量植物组织基因组DNA提取方法

说明书

本发明公开了一种基于磁珠法的高通量植物组织基因组DNA提取方法，属于分子生物学领域。本发明具体公开一种DNA提取液，包括：(a)所述DNA提取液包括如下组分：NaCl，Tris‑HCl，EDTA，CTAB，山梨醇和PVP；(b)所述DNA提取液包括如下组分：NaCl，Tris‑HCl，EDTA，SDS，山梨醇和PVP。本发明基于磁珠法，利用上述DNA提取液结合移液工作台，克服了传统方法耗时费力、手工操作步骤多、规模化标准化程度低、有机试剂对人体有害且污染环境等缺陷，DNA提取效率提高了10倍，且制备的DNA质量稳定可靠，能够满足规模化分子标记辅助育种对高通量核酸提取的需求。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，特别是涉及一种基于磁珠法的高通量植物组织基因组DNA提取方法。

背景技术

近年来，随着分子生物学的不断发展，棉花基因组测序、品种鉴定及群体遗传分析等研究也被广泛应用和推广。但这些技术的实现往往需要基于高纯度和高完整度的全基因组DNA，对全基因组DNA提取的通量提出了更高要求。

目前，较为成熟的DNA提取方法包括SDS法、CTAB法和试剂盒法，SDS法和CTAB法使用成本低廉，提取得到的DNA能够满足大多数分子实验的使用要求，但是其操作过程过于繁琐、耗时费力，且使用多种有毒有害的试剂，不能规模化使用。试剂盒则存在价格昂贵，使用效果因批次而异等问题，也难以供应高通量的分子生物实验使用需求。

发明内容

本发明的目的是提供一种基于磁珠法的高通量植物组织基因组DNA提取方法，以解决上述现有技术存在的问题，该方法服了传统方法耗时费力、手工操作步骤多、规模化标准化程度低、有机试剂对人体有害且污染环境等缺陷，并且DNA提取效率提高了10倍，所制备的DNA质量稳定可靠，能够满足规模化分子标记辅助育种对高通量核酸提取的需求。

为实现上述目的，本发明提供了如下方案：

本发明提供一种DNA提取液，包括如下(a)或(b)所示配方：

(a)所述DNA提取液包括如下组分：NaCl，Tris-HCl，EDTA，CTAB，山梨醇和PVP；

(b)所述DNA提取液包括如下组分：NaCl，Tris-HCl，EDTA，SDS，山梨醇和PVP。

优选的是，所所述DNA提取液包括如下组分：1.20-1.65mol/L NaCl，0.05-0.12mol/L Tris-HCl，0.01-0.03mol/L EDTA，15.00-23.00g CTAB，3.00-6.50g山梨醇和5.00-13.00g PVP。

优选的是，所述DNA提取液包括如下组分：0.50-0.85mol/L NaCl，0.02-0.07mol/LTris-HCl，0.005-0.015mol/L EDTA，8.00-15.00gSDS，3.00-6.50g山梨醇和8.00-12.00gPVP。

优选的是，还包括磁珠。

本发明还提供一种基于磁珠法的高通量植物组织基因组DNA提取方法，包括以下步骤：

(1)将植物组织和钢珠混合后再于超低温环境冷冻处理，之后再将植物组织进行研磨；

(2)研磨后的植物组织，与权利要求1所述的DNA提取液混匀后，水浴加热；

(3)水浴加热处理后的样品进行离心，再加入蛋白溶液，震荡、离心；

(4)离心后的样品，放于移液工作站提取基因组DNA。

优选的是，所述植物组织为棉花叶片或者种子。

优选的是，步骤(1)中，所述超低温环境为-80℃；所述研磨条件为：于1500rpm研磨30s；