[发明专利]一种细胞色素P450突变体及其应用

权利要求书

1.一种细胞色素P450突变体，其特征在于，所述突变体以LG-23为模板，在氨基酸位点G87上发生突变，所述突变为如下任意一种组合：G87A+W72T+Q73L、G87A+W72T+A74I、G87A+W72T+A74L、G87A+W72T+A74M、G87A+W72T+A74L+L181M；

所述LG-23的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.一种DNA分子，其特征在于，所述DNA分子包含编码如权利要求1所述的细胞色素P450突变体的核苷酸序列或其互补序列。

3.一种重组质粒，其特征在于，所述重组质粒含有如权利要求2所述的DNA分子。

4.根据权利要求3所述的重组质粒，其特征在于，所述重组质粒选自如下任意一种：pET-21b(+)、pET-22b(+)、pET-3a(+)、pET-3d(+)、pET-11a(+)、pET-12a(+)、pET-14b、pET-15b(+)、pET-16b(+)、pET-17b(+)、pET-19b(+)、pET-20b(+)、pET-21a(+)、p ET-23a(+)、pET-23b(+)、pET-24a(+)、p ET-25b(+)、pET-26b(+)、pET-27b(+)、pET-28a(+)、pET-29a(+)、pET-30a(+)、pET-31b(+)、pET-32a(+)、pET-35b(+)、pET-38b(+)、pET-39b(+)、pET-40b(+)、pET-41a(+)、pET-41b(+)、pET-42a(+)、pET-43a(+)、pET-43b(+)、pET-44a(+)、pET-49b(+)、pQE2、pQE9、pQE30、pQE31、pQE32、pQE40、pQE70、pQE80、pRSET-A、pRSET-B、pRSET-C、pGEX-5X-1、pGEX-6p-1、pGEX-6p-2、pBV220、pBV221、pBV222、pTrc99A、pTwin1、pEZZ18、pKK232-8、pUC-18和pUC-19。

5.一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞含有如权利要求4所述的重组质粒，所述宿主细胞为原核细胞或真核细胞。

6.根据权利要求5所述的宿主细胞，其特征在于，所述真核细胞为酵母细胞。

7.根据权利要求5所述的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞为感受态细胞。

8.根据权利要求1所述的细胞色素P450突变体、权利要求2所述的DNA分子、权利要求3或4所述的重组质粒、权利要求5-7任一项所述的宿主细胞在催化甾体化合物C7位羟基化中的应用。

9.一种熊去氧胆酸的合成方法，其特征在于，所述合成方法包括：在O₂存在条件下，以石胆酸为底物，结合NADPH再生还原系统，利用权利要求1所述的细胞色素P450突变体催化所述底物发生羟基化反应，得到熊去氧胆酸。