[发明专利]一种检测牛乳过敏原α-乳白蛋白的SERS免疫层析试纸条及其应用

说明书

本发明公开了一种检测牛乳过敏原α‑乳白蛋白的SERS免疫层析试纸条及其应用，该试纸条依次包括底板、样品垫、结合垫、NC膜和吸水垫，NC膜上设有检测线和控制线，检测线上固定有捕获抗体α‑乳白蛋白鼠单抗，控制线上固定有羊抗兔二抗，结合垫上喷有由银包金纳米粒子、拉曼信标分子和检测抗体α‑乳白蛋白兔多抗偶联结合的SERS探针。本发明中SERS探针含有拉曼信标分子，到达检测线时被捕获抗体捕获发生反应形成双抗体夹心结构，检测线显色，多余的SERS探针随缓冲液层析与控制线上的羊抗兔二抗结合，控制线显色，通过比色法和拉曼法结合可以提高牛乳过敏原α‑乳白蛋白的检测灵敏度，有利于准确评估过敏风险。

技术领域

本发明涉及一种SERS免疫层析试纸条，具体涉及一种检测牛乳过敏原α-乳白蛋白的SERS免疫层析试纸条及其应用，属于食品安全检测技术领域。

背景技术

牛奶是维生素(维生素A、维生素B6)和矿物质(钙)的摄入来源，是幼儿生长发育所必需的营养物质，对人体骨骼、头发、皮肤和牙齿起着关键作用，是婴儿最先食用的食物之一。然而，牛奶也是儿童早期食物过敏第一个也是最常出现的原因之一。过敏原引起的过敏性疾病有两个显著特点，一是始于婴幼儿期，且对食物的过敏终生不变；二是致敏剂量存在极大的人群差异。因此，有些牛乳过敏患者会因潜在的极少量牛奶而出现过敏反应。食物中的过敏原大都是蛋白质类物质，每100毫升牛乳约含有3克蛋白质，至少包含25种不同的蛋白质，所有这些蛋白质都有可能为过敏原，目前认为α-乳白蛋白(α-Lactalbumin，α-LA)是牛乳主要过敏原之一。

用于检测牛乳过敏原的方法主要包括免疫分析技术、液相色谱技术生物质谱技术、实时PCR、电喷雾电离质谱等，这些方法虽然灵敏度高，但需要较长的检测时间或者昂贵的仪器设备。

表面增强拉曼散射(SERS)是以金属纳米结构介导的信号增强效应，相比普通拉曼光谱具有更高的分辨率和灵敏度，可实现高达10–14倍的单分子拉曼信号增强，且SERS的特征拉曼光谱谱带窄，能够在复杂体系的多种干扰下为分析物提供丰富的结构信息。侧向层析免疫技术是一种抗原抗体在层析过程中发生高特异性、高亲和性的免疫反应，通过胶体金等可目测的标记物实现样品检测的技术。胶体金免疫层析技术已经被广泛应用到致病菌、蛋白质、农兽药残留等物质的检测。但是，胶体金试纸条主要通过肉眼观察结果，检测灵敏度不高，以定性和半定量检测为主。

因此，可考虑将SERS与免疫层析技术结合起来，既具有免疫层析技术检测的即时、快速、简便、高特异性的优点，又克服胶体金需要大量聚集才能显色的缺点，提高检测灵敏度，同时建立检测物浓度与拉曼特征峰强度对应的线性关系，实现目标物α-乳白蛋白的快速高效和精确定量检测。

发明内容

本发明针对传统胶体金试纸条检测灵敏度低、不能精确定量的问题，提供一种检测牛乳过敏原α-乳白蛋白的SERS免疫层析试纸条，通过SERS与免疫层析技术结合得到。

本发明还提供上述检测牛乳过敏原α-乳白蛋白的SERS免疫层析试纸条在牛乳过敏原α-乳白蛋白于5–10min内定性检测和高灵敏度定量检测中的应用。

为实现发明目的，本发明采用的技术方案为：

本发明提供的一种检测牛乳过敏原α-乳白蛋白的SERS免疫层析试纸条，依次包括底板、样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜(NC膜)和吸水垫，所述NC膜上设有检测线(T线)和控制线(C线)，其中：

所述T线设置于靠近结合垫一端，其上固定有捕获抗体α-乳白蛋白鼠单抗；

所述C线设置于靠近吸附垫一端，其上固定有羊抗兔二抗；

所述结合垫上喷有SERS探针，所述SERS探针由银包金纳米粒子、拉曼信标分子和检测抗体α-乳白蛋白兔多抗偶联结合得到。