[发明专利]一种青海湖裸鲤肌肉细胞系构建方法

权利要求书

1.一种青海湖裸鲤肌肉细胞系构建方法，包括原代培养、传代培养、细胞冻存与复苏，其特征在于，所述原代培养的细胞培养液的组分包括：基础培养基、10～30％的牛血清、200～400IU/mL青霉素、200～400μg/mL链霉素；

所述传代培养的细胞培养液的组分包括：基础培养基、10～30％牛血清、50～250IU/mL青霉素、50～250μg/mL链霉素；

所述细胞冻存的冻存液组分包括：基础培养基、10～30％牛血清、50～250IU/mL青霉素、50～250μg/mL链霉素、5～30％DMSO。

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述原代培养的细胞培养液的组分包括：基础培养基、10～20％牛血清、200～300IU/mL青霉素、200～300μg/mL链霉素；

所述传代培养的细胞培养液的组分包括：基础培养基、10～20％牛血清、50～100IU/mL青霉素、50～100μg/mL链霉素；

所述细胞冻存的冻存液组分包括：基础培养基、10～20％牛血清、50～100IU/mL青霉素、50～100μg/mL链霉素、10～20％DMSO；

进一步地，所述原代培养的细胞培养液的组分包括：基础培养基、15％牛血清、300IU/mL青霉素、300μg/mL链霉素；

所述传代培养的细胞培养液的组分包括：基础培养基、15％牛血清、100IU/mL青霉素、100μg/mL链霉素；

所述细胞冻存的冻存液组分包括：基础培养基、15％牛血清、100IU/mL青霉素、100μg/mL链霉素、10％DMSO。

3.根据权利要求1或2所述的构建方法，其特征在于，所述原代培养、传代培养中的基础培养基选自DMEM(high glucose)、DMEM(low glucose)、L-15、RPMI 1640培养基中的一种，优选为DMEM(high glucose)培养基；

所述冻存液中的基础培养基为DMEM(high glucose)培养基；

所述牛血清选自胎牛血清、小牛血清中的一种，优选胎牛血清；

进一步地，所述DMEM(high glucose)培养基为4500mg/L D-葡萄糖。

4.根据权利要求1～3任一项所述的构建方法，其特征在于，所述原代培养、传代培养、细胞冻存的培养液组分中均还包括1～5mmol/L谷氨酰胺、1～5mmol/L丙酮酸钠。

5.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，所述原代培养的细胞培养液的组分包括：基础培养基、10～20％牛血清、200～300IU/mL青霉素、200～300μg/mL链霉素、1～5mmol/L谷氨酰胺、1～5mmol/L丙酮酸钠；

所述传代培养的细胞培养液的组分包括：基础培养基、10～20％牛血清、50～100IU/mL青霉素、50～100μg/mL链霉素、1～5mmol/L谷氨酰胺、1～5mmol/L丙酮酸钠；

所述细胞冻存的冻存液组分包括：基础培养基、10～20％牛血清、50～100IU/mL青霉素、50～100μg/mL链霉素、10～20％DMSO、1～5mmol/L谷氨酰胺、1～5mmol/L丙酮酸钠；

进一步地，所述原代培养的细胞培养液的组分包括：基础培养基、15％牛血清、300IU/mL青霉素、300μg/mL链霉素、2.5mmol/L谷氨酰胺、2.5mmol/L丙酮酸钠；

所述传代培养的细胞培养液的组分包括：基础培养基、15％牛血清、100IU/mL青霉素、100μg/mL链霉素、2.5mmol/L谷氨酰胺、2.5mmol/L丙酮酸钠；

所述细胞冻存的冻存液组分包括：基础培养基、15％牛血清、100IU/mL青霉素、100μg/mL链霉素、10％DMSO、2.5mmol/L谷氨酰胺、2.5mmol/L丙酮酸钠。