[发明专利]免疫球蛋白结合多肽

说明书

本发明的目的在于提供一种多肽，其通过改变蛋白A的免疫球蛋白结合结构域的氨基酸序列，碱稳定性优异，而且能够在弱酸性区域中洗脱暂时结合的免疫球蛋白或其片段。通过在蛋白A的各免疫球蛋白结合结构域中，将第41位的丝氨酸替换为具有疏水性侧链的氨基酸、酪氨酸或组氨酸，能够得到如下多肽：对免疫球蛋白或含有其Fc区域的多肽具有结合活性、碱稳定性优异、而且能够在弱酸性的温和的条件下有效率地洗脱暂时结合的免疫球蛋白或含有其Fc区域的多肽。

技术领域

本发明涉及与免疫球蛋白或含有其Fc区域的多肽结合的多肽。更具体而言，本发明涉及对免疫球蛋白或含有其Fc区域的多肽具有结合活性，碱条件下的稳定性(碱稳定性)优异，而且能够在弱酸性区域有效率地洗脱暂时结合的免疫球蛋白或其片段的多肽。进一步地，本发明涉及该多肽的制造方法、该多肽的固定化物以及利用了该多肽的免疫球蛋白或其片段的分离方法等。

背景技术

以往，免疫球蛋白(也称为抗体)对靶物质的结合特异性高，作为研究用试剂或临床检查试剂被广泛利用。另外，近年来，通过基因重组技术的进步，确立人抗体或人源化抗体的制作技术，免疫球蛋白作为抗体药物在风湿或癌等医疗领域中已经实现了实用化。

免疫球蛋白主要通过动物细胞培养而制造，在其纯化中广泛利用使用了具有免疫球蛋白结合能力的配体的亲和色谱。在利用于免疫球蛋白的纯化的亲和色谱中，作为与免疫球蛋白特异性地结合的配体，可以用蛋白A、蛋白L、蛋白G等多肽或这些的免疫球蛋白结合结构域。

另一方面，近年来，要求提高免疫球蛋白的纯化所使用的配体的稳定性。尤其是，在免疫球蛋白的纯化中，为了病毒等的失活、固定化有配体的载体的洗涤等而使用碱溶液，在免疫球蛋白的纯化所使用的配体中，对于碱具备高稳定性成为1个重要的要素。

以往，关于提高蛋白A的碱稳定性的技术，正在深入地进行研究。例如，专利文献1中报道有：通过替换蛋白A的C结构域的特定氨基酸或蛋白A的Z结构域的特定氨基酸残基，可具备优异的免疫球蛋白结合能力以及碱稳定性。另外，专利文献2中报道有：通过将蛋白A的天冬酰胺残基替换为其他氨基酸，可具备碱稳定性。

另一方面，在使与蛋白A或其免疫球蛋白结合结构域结合的免疫球蛋白洗脱时，通常使用强酸性(pH3以下左右)的洗脱液。使用这样的强酸性的洗脱液时，有时会导致免疫球蛋白的变性或与其相伴的凝集体形成。因此，希望开发一种能够在弱酸性的温和的条件下洗脱暂时结合的免疫球蛋白的免疫球蛋白结合多肽。

如上所述，关于蛋白A以及其免疫球蛋白结合结构域，虽然报道了各种赋予碱稳定性的技术，但目前还没有对在弱酸性区域有效率地洗脱暂时结合的免疫球蛋白或其片段的技术进行充分的研究。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：国际公开号第2007/097361号

专利文献2：国际公开第2000/023580号

发明内容

发明所要解决的问题

本发明的目的在于，提供一种多肽，其通过改变蛋白A的免疫球蛋白结合结构域的氨基酸序列，碱稳定性优异，而且能够在弱酸性区域洗脱暂时结合的免疫球蛋白或含有其Fc区域的多肽。

用于解决问题的技术方案

本发明人为了解决上述问题进行了深入研究，结果发现：通过在蛋白A的各免疫球蛋白结合结构域中，将第41位的丝氨酸被替换为具有疏水性侧链的氨基酸、酪氨酸或组氨酸，可得到对免疫球蛋白或含有其Fc区域的多肽具有结合活性、碱稳定性优异，而且能够在弱酸性的温和的条件下有效率地洗脱暂时结合的免疫球蛋白或含有其Fc区域的多肽的多肽。进一步发现，通过除了上述第41位的替换以外，还将第9位的谷氨酰胺被替换为具有疏水性脂肪族侧链的氨基酸或组氨酸，或者将第15位的谷氨酸被替换为丙氨酸或组氨酸且将第24位的谷氨酸或丙氨酸替换为谷氨酰胺，能够更进一步提高碱稳定性以及在弱酸性区域的洗脱性。本发明是基于上述的见解进一步反复研究而完成的。