[发明专利]体液样品中结核的检测方法

权利要求书

1.一种检测体液样品中结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)特异性蛋白的存在的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

a)提取体液样品中的细胞外囊泡(EVs)；

b)将抗体缀合纳米颗粒与步骤(a)中的EVs混合，其中所述抗体缀合纳米颗粒与抗MTB特异性蛋白的第一抗体缀合；和

c)使用暗视野显微术检测所述MTB特异性蛋白的存在。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，其中所述MTB特异性蛋白选自下组：脂阿拉伯甘露聚糖(LAM)、LAM载体蛋白LprG和LpqH、α-晶体蛋白(HspX)、DnaK、GroEL2、KatG、SodA和GlnA。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一抗体选自下组：CS-35、CS-40和A194-01。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一抗体和所述纳米颗粒之间的缀合是亲和素-生物素或链霉亲和素-生物素缀合。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述第一抗体是生物素官能化的，并且所述纳米颗粒是亲和素或链霉亲和素官能化的。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，通过使用第二抗体提取所述EVs，其中所述第二抗体对CD9、CD81、CD91、CD63 CD81、PDCD6IP、HSPA8、ACTB、ANXA2、PKM、HSP90AA1、ENO1、ANXA5、HSP90AB1、YWHAZ、YWHAE、LprG、LpgH、HspX、DnaK、GroEL2、KatG、SodA或GlnA具有特异性。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述纳米颗粒是金纳米棒(AuNRs)、银(Ag)、氧化铋(Bi₂O₃)、铂(Pt)、氧化钆(Gd₂O₃)，或氧化铁(Fe₃O₄)纳米颗粒。

8.一种用于检测体液样品中MTB特异性蛋白的系统，其特征在于，所述系统包括：

a)暗视野显微镜；

b)样品基片；和

c)抗体缀合纳米颗粒，其中所述抗体缀合纳米颗粒与靶向所述MTB特异性蛋白的第一抗体缀合；

其中所述样品基片包被有抗细胞外囊泡特异性(EV-特异性)蛋白的第二抗体。

9.如权利要求8所述的系统，其特征在于，所述抗体缀合纳米颗粒是金、银(Ag)、氧化铋(Bi₂O₃)、铂(Pt)、氧化钆(Gd₂O₃)，或氧化铁(Fe₃O₄)纳米颗粒。

10.如权利要求8所述的系统，其特征在于，所述MTB特异性蛋白选自下组：脂阿拉伯甘露聚糖(LAM)、LAM载体蛋白LprG、LpqH、α-晶体蛋白(HspX)、DnaK、GroEL2、KatG、SodA和GlnA。

11.如权利要求8所述的系统，其特征在于，所述第一抗体是CS-35、CS-45或A194-01。

12.如权利要求8所述的系统，其特征在于，所述第二抗体对CD9、CD81、CD91、CD63CD81、PDCD6IP、HSPA8、ACTB、ANXA2、PKM、HSP90AA1、ENO1、ANXA5、HSP90AB1、YWHAZ、YWHAE、LprG、LpgH、HspX、DnaK、GroEL2、KatG、SodA或GlnA是特异性的。

13.如权利要求8所述的系统，其特征在于，所述纳米颗粒与所述第一抗体之间的缀合是生物素-亲和素或生物素-链霉亲和素缀合。