[发明专利]活性特异性细胞富集

说明书

提供了一种活性特异性细胞富集方法，所述方法能够从可以包括表达载体的宿主细胞的遗传多样性池中选择高性能宿主细胞和/或表达载体。

相关申请交叉引用

本申请要求2020年1月15日提交的美国临时专利申请第62/961,392号的权益，所述美国临时专利申请以全文引用的方式并入本文。

技术领域

本公开涉及分子生物学和生物技术制造的一般技术领域。更具体地，本公开属于用于基因产物表达的宿主细胞工程的技术领域。

背景技术

生物技术物质的产生是一个复杂的过程，受到多种因素的影响，所述多种因素影响由宿主细胞表达的基因产物，如蛋白质的质量和数量。考虑到包括表达构建体的宿主细胞群体，其中宿主细胞基因组和/或表达构建体之间存在变异(多样性)，从所述多样化群体中选择能够产生期望量的活性基因产物/细胞的宿主细胞和/或表达构建体将是有利的。当基因产物完全在宿主细胞质中表达时，实现此目的的技术挑战更难克服，并且因此不易被基因产物特异性检测试剂接触。

发明内容

显然需要用于选择高性能宿主细胞和/或表达构建体的改进方法。本公开提供了从可以包括表达构建体的宿主细胞的遗传多样性群体中活性特异性富集高性能细胞的方法。

因此，在一些实施例中，提供了用于从具有遗传多样性的宿主细胞的群体中选择表达的宿主细胞的方法，所述遗传多样性包括多个遗传变体，其中所述宿主细胞中的至少一些宿主细胞包括编码所关注的基因产物的多核苷酸序列。在一些实例中，所述方法包含培养所述宿主细胞的群体，由此所述所关注的基因产物通过所述群体中的所述宿主细胞的亚群表达，所述亚群由此包括表达的宿主细胞，其中来自所述表达的宿主细胞的所述所关注的基因产物的表达水平基于所述遗传变体而变化；标记所述亚群中的所述表达的宿主细胞中的至少一些表达的宿主细胞，其中所述标记包括使所述所关注的基因产物与可检测部分相关联，其中所述标记的量与所述表达的宿主细胞中的所述所关注的基因产物的所述表达水平成比例，由此产生经标记的表达的宿主细胞；以及选择经标记的表达的宿主细胞的子集，其中所述选择包括通过细胞分选设备检测所述可检测部分和所述标记的量。在一些实例中，表达的宿主细胞通过测量每种遗传变体的所述所关注的基因产物的相对表达水平来确定。

在其它实施例中，提供了用于从具有遗传多样性的宿主细胞的群体中选择表达的宿主细胞的方法，所述遗传多样性包括多个遗传变体，其中所述宿主细胞中的至少一些宿主细胞包括编码所关注的基因产物的多核苷酸序列。在一些实例中，所述方法包含培养所述宿主细胞的群体，由此所述所关注的基因产物通过所述群体中的所述宿主细胞的亚群表达，所述亚群由此包括表达的宿主细胞，其中所述表达的宿主细胞的预定特性基于所述遗传变体而变化；标记所述亚群中的所述表达的宿主细胞中的至少一些表达的宿主细胞，其中所述标记包括使所述所关注的基因产物与可检测部分相关联，其中所述标记的量与所述表达的宿主细胞中的所述所关注的基因产物的所述预定特性成比例，由此产生经标记的表达的宿主细胞；以及选择经标记的表达的宿主细胞的子集，其中所述选择包括通过细胞分选设备检测所述可检测部分和所述预定。在特定实例中，所述表达的宿主细胞的所述预定特性包括所关注的活性基因产物的表达水平、所述所关注的基因产物的表达水平、所述所关注的基因产物的适当蛋白质折叠、所述所关注的基因产物的适当折叠的蛋白质的表达水平、细胞活力和/或生物质的量。在另外的实例中，通过测量每种遗传变体的所述所关注的基因产物的相对表达水平来确定表达的宿主细胞。