[发明专利]活性特异性细胞富集

权利要求书

1.一种用于从具有至少1000个遗传多样性的宿主细胞的群体中选择宿主细胞的方法，其中所述宿主细胞中的至少一些宿主细胞包括编码所关注的基因产物的多核苷酸序列，所述方法包括：

培养所述宿主细胞的群体，由此所述所关注的基因产物通过所述群体中的所述宿主细胞的亚群表达，所述亚群由此包括表达的宿主细胞；

标记所述亚群中的所述表达的宿主细胞中的至少一些表达的宿主细胞，其中所述标记包括使所述所关注的基因产物与可检测部分相关联，由此产生经标记的表达的宿主细胞；以及

选择经标记的表达的宿主细胞的子集，其中所述选择包括通过细胞分选设备检测所述可检测部分。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述宿主细胞群体的所述遗传多样性是由所述宿主细胞群体中的所述宿主细胞中的至少一些宿主细胞构成的宿主细胞基因组变异、一种或多种表达构建体的多核苷酸序列变异或其组合。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述宿主细胞的群体的所述遗传多样性为200,000-1,000,000。

4.一种用于从具有遗传多样性的宿主细胞的群体中选择表达的宿主细胞的方法，所述遗传多样性包括多个遗传变体，其中所述宿主细胞中的至少一些宿主细胞包括编码所关注的基因产物的多核苷酸序列，所述方法包括：

培养所述宿主细胞的群体，由此所述所关注的基因产物通过所述群体中的所述宿主细胞的亚群表达，所述亚群由此包括表达的宿主细胞，其中来自所述表达的宿主细胞的所述所关注的基因产物的表达水平基于所述遗传变体而变化；

标记所述亚群中的所述表达的宿主细胞中的至少一些表达的宿主细胞，其中所述标记包括使所述所关注的基因产物与可检测部分相关联，其中所述标记的量与所述表达的宿主细胞中的所述所关注的基因产物的所述表达水平成比例，由此产生经标记的表达的宿主细胞；以及

选择经标记的表达的宿主细胞的子集，其中所述选择包括通过细胞分选设备检测所述可检测部分和所述标记的量。

5.一种用于从具有遗传多样性的宿主细胞的群体中选择表达的宿主细胞的方法，所述遗传多样性包括多个遗传变体，其中所述宿主细胞中的至少一些宿主细胞包括编码所关注的基因产物的多核苷酸序列，所述方法包括：

培养所述宿主细胞的群体，由此所述所关注的基因产物通过所述群体中的所述宿主细胞的亚群表达，所述亚群由此包括表达的宿主细胞，其中所述表达的宿主细胞的预定特性基于所述遗传变体而变化；

标记所述亚群中的所述表达的宿主细胞中的至少一些表达的宿主细胞，其中所述标记包括使所述所关注的基因产物与可检测部分相关联，其中所述标记的量与所述表达的宿主细胞中的所述所关注的基因产物的所述预定特性成比例，由此产生经标记的表达的宿主细胞；以及

选择经标记的表达的宿主细胞的子集，其中所述选择包括通过细胞分选设备检测所述可检测部分和所述预定。

6.根据权利要求5所述的方法，其中所述表达的宿主细胞的所述预定特性包括所关注的活性基因产物的表达水平、所述所关注的基因产物的表达水平、所述所关注的基因产物的适当蛋白质折叠、所述所关注的基因产物的适当折叠的蛋白质的表达水平、细胞活力和/或生物质的量。

7.根据权利要求1到5中任一项所述的方法，其进一步包括测量每种遗传变体的所述所关注的基因产物的相对表达水平。

8.根据权利要求1到5中任一项所述的方法，其中所述选择包括荧光激活的细胞分选。

9.根据权利要求1到5中任一项所述的方法，其中所述可检测部分包括荧光部分，并且所述选择包括选择具有最高荧光发射的0.01％-5％的细胞。

10.根据权利要求9所述的方法，其中所述选择包括选择具有最高荧光发射的0.5％的细胞。

11.根据权利要求1到5中任一项所述的方法，其中所述所关注的基因产物包括缺乏信号肽的多肽。