[发明专利]一种用于分析体液蛋白质组的方法

说明书

一种用于分析体液蛋白质组的方法，该方法包括：采用亲和技术去除初始样品A中的高丰度蛋白，获得低丰度蛋白富集的待测样品I；采用化学沉淀法去除初始样品B中的高丰度蛋白，获得低丰度蛋白富集的待测样品II，其中初始样品A和初始样品B来自同一受试者的同一份体液样品；对待测样品I进行蛋白质组学分析，获得蛋白质组数据集I；对待测样品II进行蛋白质组学分析，获得蛋白质组数据集II；基于所述蛋白质组数据集I和所述蛋白质组数据集II，确定体液中最终定量的蛋白质组数据集。

技术领域

本发明属于生化检测领域，特别涉及一种分析体液蛋白质组的方法。

背景技术

体液中的血浆和血清因其丰富且易于获取，通常用于临床诊断和预后分析。血浆蛋白质可以用作个体健康状况的指标和临床检测的生物标志物，越来越多的研究集中在血浆蛋白质上。血浆蛋白质组学可以高通量地对临床队列中的多种蛋白质进行鉴定和定量分析，是血浆蛋白质研究的强有力的工具。

临床研究中往往需要对成百上千数量的样品进行定量蛋白质组分析，同时为了开发更多的血浆生物标志物，还需要提高蛋白质组的覆盖度。但现有技术中的各种技术难点(例如无法有效率的去除会造成干扰的高丰度蛋白)，往往限制了样品分析通量。目前文献报道的血浆蛋白质组覆盖度为500-1000个蛋白，限制了血浆蛋白标志物的开发。因此，需要开放新的方法和系统，提高蛋白质组分析的通量和效率。

发明内容

在一些实施例中，用于分析体液蛋白质组的方法包括：

采用亲和技术去除初始样品A中的高丰度蛋白，获得低丰度蛋白富集的待测样品I；

采用化学沉淀法去除初始样品B中的高丰度蛋白，获得低丰度蛋白富集的待测样品II，其中所述初始样品A和所述初始样品B来自同一受试者的同一份体液样品；

对所述待测样品I采用经优化的数据非依赖性采集技术进行蛋白质组学分析，获得蛋白质组数据集I；

对所述待测样品II采用经优化的数据非依赖性采集技术进行蛋白质组学分析，获得蛋白质组数据集II；

基于所述蛋白质组数据集I和所述蛋白质组数据集II，确定所述体液样品最终定量的蛋白质组数据集。

附图说明

本说明书将以示例性实施例的方式进一步说明，这些示例性实施例结合附图进行详细描述。这些实施例并非限制性的，其中：

图1示出了根据本发明的一些实施例的用于分析体液蛋白质组的方法的流程图。

图2A-图2F示出了根据本发明的一些实施例的采用数据非依赖性采集(dataindependent acquisition，DIA)技术进行血浆蛋白质组分析的结果，其中，图2A和图2B分别为15cm、25cm和50cm色谱柱和90min的梯度条件下DIA鉴定的多肽数量和蛋白数量；图2C和图2D分别为25cm色谱柱和90min、120min和150min的梯度鉴定的多肽数量和蛋白数量；图2E和图2F分别为50cm色谱柱和90min、120min和150min的梯度鉴定的多肽数量和蛋白数量。

图3A-图3D示出了根据本发明的一些实施例的采用DIA技术进行血浆蛋白质组分析的结果，其中，图3A和图3B分别是40个、50个和60个隔离窗口下鉴定的多肽数量和蛋白数量；图3C和图3D分别是40个、50个和60个隔离窗口下鉴定的蛋白强度的变异系数(CV)分布和多肽强度的CV分布。

图4A和图4B示出了根据本发明的一些实施例的采用优化的DIA技术进行蛋白质组分析得到的多肽数量统计图(图4A)和蛋白数量统计图(图4B)；其中，undepleted代表采用未去除高丰度蛋白的原始血浆样品的酶切肽段；样品①代表采用肽段集合I；样品②代表采用肽段集合II。