[发明专利]用于癌症的纤连蛋白额外结构域B(EDB)特异性CAR-T

权利要求书

1.一种嵌合抗原受体(CAR)，其包含：

(1)对纤连蛋白胞外结构域B(EDB)具有特异性的抗原结合结构域；

(2)选自CD3ζ、CD3ε、CD3γ、CD3δ、CD4、CD8、CD28、OX40或CD137膜蛋白的胞外结构域和/或跨膜(TM)结构域；和

(3)具有或不具有共刺激结构域的CD3ζ细胞内ITAM(基于免疫受体酪氨酸的活化基序)结构域；

其中，当所述CAR在T细胞表面表达时，所述CAR在(a)与可溶性EDB结合后，(b)与膜结合的EDB结合后，和/或(c)与细胞外基质(例如，作为细胞附着支架的纤连蛋白网状结构的组成成分的细胞外基质)中的EDB结合后，能够激活T细胞。

2.根据权利要求1所述的CAR，其中所述抗原结合结构域是scFv、单链抗体、纳米抗体(例如，VHH(驼科动物Ig)的衍生物)、单域抗体(dAb，VH或VL结构域的衍生物)、双特异性T细胞接合物(BiTE，一种双特异性的双链抗体)和双亲和力再靶定蛋白(DART，一种双特异性的双链抗体))；抗运载蛋白(脂蛋白的衍生物)；Adnectin(第10个FN3(纤连蛋白))；设计的锚蛋白重复蛋白(DARPins)；或者亲和性多聚体(avimer)。

3.根据权利要求1所述的CAR，其中所述抗原结合结构域是人scFv或人源化scFv。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的CAR，其进一步包含：在抗原结合结构域和TM结构域之间的铰链/间隔结构域。

5.根据权利要求4所述的CAR，其中所述铰链/间隔结构域和TM结构域源自相同的蛋白质。

6.根据权利要求5所述的CAR，其中所述相同的蛋白质是CD8α，并且其中所述铰链/间隔区是CD8α的胞外结构域。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的CAR，其中，(3)包括所述共刺激域。

8.根据权利要求7所述的CAR，其中所述共刺激域来自CD28。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的CAR，其中，(3)包括两个共刺激域。

10.根据权利要求9所述的CAR，其中，所述两个共刺激域包括：来自CD28的一个共刺激域，和/或来自CD27、4-1BB或OX-40的一个共刺激域。

11.根据权利要求1所述的CAR，其包含SEQ ID NO：1的残基21-236的scFv，以及CD8α胞外结构域和跨膜结构域、4-1BB胞内结构域和CD3zeta胞内结构域。

12.根据权利要求11所述的CAR，其进一步包含N端信号肽序列(例如hIL-2信号肽序列，或SEQ ID NO：1的残基1-20)。

13.根据权利要求12所述的CAR，其包含SEQ ID NO：1的多肽。

14.一种多核苷酸，其编码根据权利要求1-13中任一项所述的CAR，例如SEQ ID NO：2的多核苷酸。

15.根据权利要求14所述的多核苷酸，其经密码子优化以在人细胞中表达。

16.一种包含根据权利要求14或15所述的多核苷酸的载体。

17.根据权利要求16所述的载体，其特征在于，所述载体为病毒载体，其能够在T细胞、巨噬细胞和/或NK细胞，例如原代人T细胞、巨噬细胞或NK细胞中感染和/或表达所述CAR。

18.根据权利要求17所述的载体，其是慢病毒载体。