[发明专利]肿瘤浸润淋巴细胞的培养方法及其用途

权利要求书

1.一种培养肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)的方法，使源自肿瘤组织且未经体外扩增的TIL经过至少两个阶段的体外扩增，且在第二个阶段的体外扩增中，使经体外扩增TIL在与包含特异性结合CD3的抗体以及IL-2的物质接触12至72小时之后，与饲养细胞共培养。

2.根据权利要求1所述的方法，与在第二个阶段的体外扩增中使经体外扩增的TIL在与包含特异性结合CD3的抗体以及IL-2的物质接触同时与饲养细胞共培养相比，在第二个阶段的体外扩增中使经体外扩增的TIL在与包含特异性结合CD3的抗体以及IL-2的物质接触12至72小时之后与饲养细胞共培养获得的TIL显示出改善的TIL特性。

3.根据权利要求2所述的方法，所述改善的TIL特性包含选自以下组的一种或多种：增加的TIL细胞数量，增加的活细胞比例，增加的存续能力，改善的T细胞亚群比例，提高的细胞因子分泌能力，提高的肿瘤细胞杀伤能力，提高的T细胞受体(TCR)克隆多样性和提高的组织和/或肿瘤中TIL细胞数量。

4.根据权利要求3所述的方法，所述改善的T细胞亚群比例包括选自以下组的一种或多种：增加TIL中中心记忆T细胞比例，降低调节性T细胞的比例，增加活化T细胞比例，增加肿瘤特异性T细胞比例，和增加干细胞样T细胞比例。

5.根据权利要求1所述的方法，使经扩增的TIL在与包含特异性结合CD3的抗体以及IL-2的物质接触约12到48小时之后与饲养细胞共培养。

6.根据权利要求1所述的方法，使经扩增的TIL在与包含特异性结合CD3的抗体以及IL-2的物质接触约12、24、48或72小时之后与饲养细胞共培养。

7.根据权利要求1所述的方法，所述特异性结合CD3的抗体以以下组的形式的一种或多种加入到所述TIL的细胞培养基中：所述特异性结合CD3的抗体，表达所述特异性结合CD3的抗体的工程化细胞，包含所述特异性结合CD3的抗体的纳米颗粒，和包含所述特异性结合CD3的抗体的聚合物。

8.根据权利要求1所述的方法，所述IL-2在所述TIL的细胞培养基中的初始浓度为至少1000IU/mL。

9.根据权利要求1所述的方法，所述IL-2以选自以下组的形式的一种或多种加入到所述TIL的细胞培养基中：所述IL-2，表达所述IL-2的工程化细胞，包含所述IL-2的纳米颗粒，和包含所述IL-2的聚合物。

10.根据权利要求1所述的方法，所述TIL为源自所述肿瘤组织的碎片的TIL。

11.根据权利要求10所述的方法，所述碎片的体积约为1-27立方毫米。

12.根据权利要求10所述的方法，所述碎片的体积约为27立方毫米。

13.根据权利要求1所述的方法，所述饲养细胞包括抗原呈递细胞。

14.根据权利要求1所述的方法，所述饲养细胞包括选自以下组的一种或多种：外周单个核细胞，树突状细胞，和人工抗原呈递细胞。

15.根据权利要求1所述的方法，所述饲养细胞为外周单个核细胞。

16.根据权利要求1所述的方法，所述饲养细胞为经过辐照的饲养细胞。

17.根据权利要求1所述的方法，所述TIL和饲养细胞共培养包括将所述饲养细胞的表面与所述TIL的表面相接触。

18.根据权利要求1所述的方法，所述TIL和饲养细胞共培养包括将所述饲养细胞加入所述TIL的细胞培养基中。