[实用新型]一种高通量微生物检测质谱试剂盒

说明书

本实用新型公开了一种高通量微生物检测质谱试剂盒，试剂盒包括微生物检测芯片、柔性涂菌棒、菌体裂解液、基质、基质溶解液和说明书。本实用新型的试剂盒可配合裂解法和涂菌法进行微生物检测，微生物检测芯片和柔性涂菌棒均为一次性使用，可节省清洗靶板的时间和成本，避免样本的交叉污染，柔性涂菌棒不易损伤检测位点内表面结构，降低检测不准确，杜绝了临床上重复测试、增加人员感染的风险，更符合临床需求。

技术领域

本实用新型属于微生物检测领域，涉及一种微生物检测质谱试剂盒，尤其涉及一种可同时实现微生物样本预处理及检测，具有较高的检测通量的微生物检测质谱试剂盒。

背景技术

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术是一种“软电离”技术，具有快速，可靠性高，操作简便等优点。MALDI的特点在于，样本中需要引入能够吸收激光能量的有机基质。基质在激光的照射下被激发，引起温度的快速上升，从而促进待分析样本的气化和电离。样本离子在加速电场中经过加速，再通过飞行管到达质量检测器。由于不同质荷比的离子在加速电场中获得的速度不同，因而在经过飞行管后到达质量检测器的的时间也不相同，从而通过记录不同离子到达检测器的时间可以检测出不同质荷比的离子。由于MALDI技术产生的离子基本上带一个电荷，因而可以有效的对蛋白质、核酸和多糖等生物大分子进行有效的检测。

区别于传统的生化方法，MALDI-TOF质谱平台检测通量高，分析速度快，特别适用于蛋白质、多肽等生物大分子的检测。微生物样本的菌体内含有高丰度、表达稳定且进化保守的核糖体蛋白，通过MALDI-TOF技术获得的蛋白质离子峰可用于绘制微生物蛋白指纹图谱。通过指纹图谱数据库的建立，将临床微生物样本的质谱数据与已知微生物的标准蛋白指纹图谱进行比较，即可达到微生物种类的鉴定的目的。临床上对于如何实现对患者感染的病菌实现快速准确的鉴定，并利用其结果指导患者用药有着迫切需求。MALDI-TOF质谱平台因其速度快、灵敏度高、鉴定准确率高等优势已成为临床微生物实验室的常规配备。

建立稳定可靠的MALDI-TOF质谱微生物样本预处理及检测方法是实现微生物快速检测的关键。在常见的微生物鉴定试剂盒中，其主要组成包括微生物裂解液、基质、基质溶解液等(CN107064286A；CN107917950A)。通常的操作是通过裂解法或涂菌法将细菌/真菌等微生物转移至不锈钢质谱靶板上再进行质谱检测。其中裂解液法的操作步骤为：挑取少许微生物菌体置于离心管内，加入裂解液进行裂解，将裂解产物滴加入质谱仪配套的靶板上的点样孔内，待干燥后再加入基质进行检测。涂菌法的操作步骤为：用牙签或移液器枪头等涂布工具直接挑取少量微生物菌体于靶板上的点样孔内，再加入裂解液进行裂解，待干燥后再加入基质进行检测。

但MALDI-TOF质谱仪是一种灵敏度较高的仪器，靶板高度、平整度、材质和样本分布的微小变化及微生物菌体过多、过少或分布不均匀都将影响质谱出峰信号和鉴定结果。在涂菌法操作过程中，运用较多的涂布工具为移液器枪头或牙签，这两种工具在涂布过程中易损伤质谱靶板表面且较难将菌体涂布均匀。目前，在MALDI检测中最常使用的基底材料为不锈钢靶板，由于反复使用，在使用后需要反复清洗，耗时费力且容易留下样本残留，并且多次使用牙签等涂布工具将细菌转移到靶板上的过程易使靶板产生划痕和变形，容易造成平整度下降，质谱检测的信噪比和质量精度下降，削弱质谱检测结果的可靠性和可信度。另外，由于使用金属靶板存在结晶不均匀的问题，在质谱检测过程中，容易造成检测分辨率的下降，无法得到准确的检测结果，临床上重复测试，增加人员感染风险。专利CN201710758245.4在接种软管表面涂一层聚四氟乙烯，可以使接种过程更加顺畅且不易破坏琼脂块，使接种均匀。但聚四氟乙烯的柔韧度不足以满足质谱检测对靶板精细微观结构保护的要求，且该接种管不适用于尺寸较小的质谱靶板上的检测位点。

实用新型内容