[发明专利]花生致敏蛋白Ara h1的表达纯化及其制备的IgE抗体检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种花生致敏蛋白Ara h1的表达纯化及其制备的IgE抗体检测试剂盒。该花生致敏蛋白Ara h1的IgE抗体检测试剂盒包括标记有第一物质的花生致敏蛋白Ara h1，所述第一物质和第二物质为具有特异亲和性的一对物质，所述花生致敏蛋白Ara h1通过如下步骤制备：确定要表达的花生致敏蛋白Ara h1的氨基酸序列，对所述氨基酸序列经过密码子优化，得到花生致敏蛋白Ara h1在原核细菌中的核苷酸序列，将所述核苷酸序列插入到pET28b载体中获得pET28b‑Arah1载体，将所述pET28b‑Arah1载体转化至原核表达感受态细胞中，进行表达，制得花生致敏蛋白Ara h1。本发明的IgE抗体检测试剂盒，能够快速准确地检测花生致敏蛋白Ara h1的IgE抗体。

技术领域

本发明属于生物检测技术领域，涉及一种花生致敏蛋白Ara h1的IgE抗体检测试剂盒，及其所使用的花生致敏蛋白Ara h1的制备方法。

背景技术

食物的不良反应分为两类，第一类是非免疫系统介导的，第二类是免疫系统介导的。以乳糖不耐症等代表的食物不耐受反应为非免疫系统介导的；而食物过敏反应则是由免疫系统介导的。近年来，食物过敏对人类健康带来了日益严重的危害。食品过敏是指人在摄入某种食物之后产生的一种不良反应，在医学上属于变态反应的一种，可以引起身体一些组织和器官甚至全身出现强烈反应。食物过敏会出现多种症状，包括皮肤、消化道、呼吸道及心血管系统等不适。任何食物都有可能成为过敏原。

一个人对某种食物过敏是由多种因素造成的，包括基因遗传性、个人体质及生活环境等因素。过敏反应根据机制分为I、II、III、IV四种类型，其中90％以上的食物过敏反应属于IgE介导的I型过敏反应。目前，食物过敏在西方国家儿童中的发病率为2％～8％，成人是1％～2％。WHO/FAO认证的8大类过敏食物包括花生、鱼、贝类、奶、蛋、大豆、坚果和小麦，它们引发了约90％食物过敏反应。在美国，花生等坚果是致死性过敏性休克的主要“元凶”。据调查，花生过敏在世界范围内都相对普遍，花生过敏在美国、加拿大、英国、以色列的儿童发病率分别达到了1.4％，1.7％，1.9％和0.2％。目前在花生中已发现了17种过敏蛋白，其中Ara h1和Ara h2被认为是两种最主要的过敏原，Ara h1占花生蛋白总量的12％～16％，为花生中含量最高的致敏蛋白。研究发现Ara h1全长蛋白含有23个线性抗原表位，且热稳定性强，耐酶解，故能激活树突状抗原提呈细胞而导致机体发生过敏反应。

检测食物中花生过敏原成分主要有2类方法：基于过敏原基因残留检测的方法，如聚合酶链式反应(PCR)；基于致敏蛋白检测的方法，如酶联免疫吸附法(ELISA)、表面等离子共振法(SPR)、质谱法。(1)PCR是一种以检测DNA/RNA为基础的方法，该方法较早地被应用于过敏原的检测，而国内陈家杰等采用套式PCR和荧光实时定量PCR两种方法检测食品中花生主要过敏原Ara h1基因成分，从而定性检测食品中是否含有花生过敏原成分。但是，PCR技术是基于DNA的检测技术，而不直接检测致敏蛋白。现代食品工业技术可以将蛋白质与DNA等其他物质完全分离，这样也给PCR法带来了无法逾越的困难。(2)ELISA法利用抗体抗原之间的特异性反应直接检测致敏蛋白。它是花生过敏原检测的常用方法之一。目前，用于花生过敏原的检测方法有双抗夹心ELISA法和竞争ELISA法。但是在实际应用中这两种方法也存在检测时间长、检测仪器设备要求高、需要专业人员操作等诸多缺点；另外，虽然能够判别出是否对花生过敏，但并不能准确判别出是对哪种花生蛋白过敏。

发明内容

针对上述问题，本发明提供一种花生致敏蛋白Ara h1的IgE抗体检测试剂盒，能够快速准确地检测花生致敏蛋白Ara h1的IgE抗体。本发明还提供一种花生致敏蛋白Ara h1的制备方法，为花生致敏蛋白Ara h1过敏的特异性检测提供原料支持。