[发明专利]花生致敏蛋白Ara h1的表达纯化及其制备的IgE抗体检测试剂盒

权利要求书

1.一种花生致敏蛋白Ara h1的IgE抗体检测试剂盒，其特征在于，包括标记有第一物质的花生致敏蛋白Ara h1，所述第一物质和第二物质为具有特异亲和性的一对物质，所述花生致敏蛋白Ara h1通过如下步骤制备：确定要表达的花生致敏蛋白Ara h1的氨基酸序列，对所述氨基酸序列经过密码子优化，得到花生致敏蛋白Ara h1在原核细菌中的核苷酸序列，将所述核苷酸序列插入到pET28b载体中获得pET28b-Arah1载体，将所述pET28b-Arah1载体转化至原核表达感受态细胞中，进行表达，制得花生致敏蛋白Ara h1。

2.根据权利要求1所述的IgE抗体检测试剂盒，其特征在于，所述IgE抗体检测试剂盒还包括固相载体及酶标记鼠抗人IgE抗体，所述固相载体包括载体膜，所述载体膜上包被有所述第二物质。

3.根据权利要求1或2所述的IgE抗体检测试剂盒，其特征在于，所述第一物质和所述第二物质分别为生物素和抗生物素抗体，或为生物素和链霉亲和素；和/或，所述酶标记抗人IgE抗体为HRP标记鼠抗人IgE单克隆抗体、ALP标记鼠抗人IgE单克隆抗体或吖啶酯标记鼠抗人IgE单克隆抗体。

4.根据权利要求1所述的IgE抗体检测试剂盒，其特征在于，要表达的花生致敏蛋白Arah1的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；和/或，所述核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

5.根据权利要求1所述的IgE抗体检测试剂盒，其特征在于，在所述核苷酸序列两端添加NdeI和EcoRI，同时N端融合GS Linker、6X His和凝血酶位点，C端融合Avi Tag，插入到pET28b载体中。

6.一种花生致敏蛋白Arah1的制备方法，其特征在于，确定要表达的花生致敏蛋白Arah1的氨基酸序列，对所述氨基酸序列经过密码子优化，得到花生致敏蛋白Ara h1在原核细菌中的核苷酸序列，将所述核苷酸序列插入到pET28b载体中获得pET28b-Arah1载体，将所述pET28b-Arah1载体转化至原核表达感受态细胞中，进行表达，制得花生致敏蛋白Ara h1。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，将花生致敏蛋白Ara h1的氨基酸序列去除N端部分氨基酸序列后得到要表达的花生致敏蛋白Ara h1的氨基酸序列；和/或，要表达的花生致敏蛋白Ara h1的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

8.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。

9.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，在所述核苷酸序列两端添加NdeI和EcoRI，同时N端融合GS Linker、6X His和凝血酶位点，C端融合Avi Tag，插入到pET28b载体中获得pET28b-Arah1载体，将所述pET28b-Arah1载体转化至原核表达感受态BL21(DE3)中制得菌液，加入到培养基中，加入诱导物诱导表达。

10.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，具体通过如下步骤制得花生致敏蛋白Ara h1：

将pET28b-Arah1载体转化至原核表达感受态BL21(DE3)中制得pET28b-Arah1(DE3)菌液，取菌液加入到含卡那霉素的培养基中，37℃、200rpm培养过夜，次日按比例接种于含卡那霉素的培养基中，培养至吸光值OD600为0.6左右时，加入IPTG至浓度为1mmol/L，进行诱导表达，离心，收集上清，进行纯化；

纯化上清用聚丙烯酰胺凝胶电泳分析蛋白表达量。