[发明专利]肠道类器官定向分化潘氏细胞的方法

权利要求书

1.一种肠道类器官定向分化潘氏细胞的方法，其特征在于，包括如下步骤：

获取肠道类器官；

将所述肠道类器官置入类器官培养基中；

于所述类器官培养中加入DAPT和CHIR99021，对所述类器官培养基中的所述肠道类器官刺激预设时间。

2.根据权利要求1所述的肠道类器官定向分化潘氏细胞的方法，其特征在于：所述预设时间为5～10天。

3.根据权利要求1所述的肠道类器官定向分化潘氏细胞的方法，其特征在于：所述获取肠道类器包括如下步骤：

取小肠，用冷PBS冲洗肠管若干次，去除肠内容物；

将所述肠管纵行切开，在剪成预定长度的肠段；

将所述肠段移入装有PBS的试管中；

晃动所述试管清洗，析出第一上清液，并去除第一上清液；

重复上一步骤若干次，直到所述第一上清液清亮；

弃掉最后得到的所述第一上清液；

向所述试管中加入隐窝分离液轻摇，以析出第二上清液；

去除所述第二上清液；

向所述试管中加入PBS，晃动试管，以析出第三上清液，观察是否有肠道单元，并收集所述第三上清液；

重复上述步骤，直至收集到预设容积的所述第三上清液；

将所述第三上清液进行离心处理，以得到肠道细胞；

使用洗涤液重悬所述肠道细胞，并对重悬后的所述肠道细胞进行离心处理，以得到所述肠道类器官；

重复上一步骤。

4.根据权利要求3所述的肠道类器官定向分化潘氏细胞的方法，其特征在于：用所述冷PBS冲洗所述肠管的次数为3～4次；所述预定长度为0.2cm～0.6cm；向所述试管中加入隐窝分离液之后，于3℃～6℃下轻摇15min～35min；所述预设容积为40ml～60ml。

5.根据权利要求3所述的肠道类器官定向分化潘氏细胞的方法，其特征在于：将所述第三上清液进行离心处理的过程中，离心机的转速为300×g，离心处理的时间为3min～7min，离心处理的温度为2℃～6℃；对重悬后的所述肠道细胞进行离心处理的过程中，离心机的转速为300×g，离心处理的时间为3min～7min，离心处理的温度为2℃～6℃。

6.根据权利要求3所述的肠道类器官定向分化潘氏细胞的方法，其特征在于：所述洗涤液包括DMEM、BSA及双抗。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的肠道类器官定向分化潘氏细胞的方法，其特征在于：所述将所述肠道类器官置入类器官培养基中包括：

根据比例用类器官培养基和基质胶重悬所述肠道类器官，以得到类器官悬液；

将所述类器官悬液悬空滴入培养孔内。