[发明专利]可溶性表达EG95蛋白及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种可溶性表达EG95蛋白及其制备方法和应用，该蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，是在羊棘球蚴EG95基因后通过柔性连接子连接一个促溶标签而得到，其保留了完整的EG95蛋白序列，最大限度地保留了原蛋白的免疫原性，所使用的促溶标签对原蛋白影响小，不但能有效促溶，还不会对镍柱纯化或免疫等造成影响；相对于包涵体表达生产工艺的复杂性，可溶性表达简化了蛋白生产工艺，提高了生产效率，减少了多个纯化步骤带来的蛋白损失，还减少了氨氮废水的排放量；该蛋白可作为抗原用于制备羊棘球蚴病基因工程亚单位疫苗，动物试验结果证实，由其制得的疫苗具有良好的免疫效力和安全性。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，涉及一种可溶性表达EG95蛋白及其制备方法和应用。

背景技术

羊棘球蚴病俗称包虫病(Hydatidosis)，是由棘球属的细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus，EG)幼虫感染羊所引起的一种人兽共患病，是中国卫生部门规划防治的五大寄生虫病之一。包虫病主要流行于我国西部农牧区的350个县，受威胁人口约5000万，高原地区人群包虫病平均患病率为1.2％，局部高达12％以上。据农业部门推算，全国每年患包虫病的家畜在5000万头以上，因家畜死亡和脏器废弃造成的直接经济损失逾30亿元。

EG95抗原是一种膜蛋白，在大肠杆菌及酵母等菌体中表达，为难溶的包涵体，要经过变性、复性等多个步骤才能配苗，生产工艺十分复杂，中间过程抗原损失严重，尿素变性还产生大量氨氮废水，加大了环保处理难度，因此，不少学者开展了EG95抗原的可溶性表达研究。吴竞等通过截短EG95原始序列，并连接到pET载体上，实现可溶性表达(CN201510794937.5)。中国农业大学刘丹等通过抗原表位串联表达，实现EG95可溶。但是，这些方法都需要截短或截断EG95蛋白，且去除氨基酸序列较长，可能对EG95蛋白的空间结构及免疫原性造成难以预测的影响。促进蛋白的溶解还可以添加促溶标签，但传统的MBP(42KD)、NUSA(55KD)等标签，分子量都较大，可能对镍柱纯化或免疫评估造成影响。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的之一在于提供一种可溶性表达EG95蛋白，可以实现EG95完整序列的可溶性表达，保留EG95蛋白的全部免疫原性，同时不会对镍柱纯化或免疫等造成影响；目的之二在于提供该可溶性表达EG95蛋白的制备方法，目的蛋白表达量高、纯度高，生产工艺简化，安全环保；目的之三在于提供该可溶性表达EG95蛋白的用途。

经研究，本发明提供以下技术方案：

1.可溶性表达EG95蛋白，氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.可溶性表达EG95蛋白的编码基因。

进一步，所述编码基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

3.含有所述编码基因的重组表达载体。

进一步，所述重组表达载体是将核苷酸序列如SEQ ID No.1所示的可溶性表达EG95蛋白的编码基因克隆入pGEX-3X载体中而得到。

4.含有所述重组表达载体的工程菌。

进一步，所述工程菌是将重组表达载体转入大肠杆菌Rosseta(DE3)中得到，所述重组表达载体是将核苷酸序列如SEQ ID No.1所示的可溶性表达EG95蛋白的编码基因克隆入pGEX-3X载体中得到。